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在實際操作中,凍存的原代細胞要進行復蘇,復蘇之后再培養傳代。復蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細胞內,再次形成胞內結晶損傷細胞。進行細胞復蘇的操作步驟如下:
(1)佩戴眼鏡和手套,從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。
(2)迅速放入38℃水浴中,并不時搖動,在1分鐘內使其*融化,然后在無菌下取出細胞。
(3)在1000r/min速度下離心5~10分鐘,棄去上層液,加入適量培養液后接種于培養瓶中,接種濃度1×109/L,置37℃溫箱靜置培養,次日更換一次培養液,繼續培養,觀察生長情況。若細胞密度較高,及時傳代?;驘o需離心直接將細胞加入瓶中,并加入培養基貼壁培養12~24小時后,充去上清,換入新鮮培養基繼續培養。
按照以上步驟復蘇的凍存原代細胞存活率高,生長及形態良好。
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5-氨基-3-羧基-2,4,6-三碘-N-甲基苯甲酰胺標準品
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原代細胞
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