實驗操作步驟：
a．采用認可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。   
b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

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細胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長特性，在適當(dāng)?shù)臅r候進行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細胞，一般按1：2-1：5 稀釋細胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

微型RNA（miRNA）同位素探針制備試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

組織賴氨酸（lysine）含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

組織沉默調(diào)節(jié)蛋白3（SIRT3）活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

冰凍切片組織線粒體復(fù)合物II蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

通用型丁酰膽堿酯酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細胞血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1（ACE1）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 石蠟切片組織COLLAGEN I蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

體胱氨酸（cystine）含量比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

組織樣品組織蛋白酶G（CATHEPSIN G）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 載玻片細胞CYTOCHROME C蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

植物半胱氨酸（cysteine）含量比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

血樣品組織蛋白酶B（CATHEPSIN B）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

PrimaCell™人子宮平滑肌細胞試劑盒規(guī)格麥芽三糖 檢查用 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg

卡特羅 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg

氨魯米特 檢查用 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 50mg

大豆油    含量測定 進口/國產(chǎn) 2-8℃，避光 規(guī)格: 2mg

對羥酯 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 50mg

泛 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg

格列喹酮 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg

格列吡嗪 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg

核黃素磷  進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg

吉非羅齊 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg

麥芽糖 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 1mg

尿素 含量測定 進口/國產(chǎn) 常溫，避光 規(guī)格: 50mg

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。