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實驗操作步驟:
a.采用認可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。
b.立即在無菌超凈臺內用70%乙醇擦洗整個動物。
c.用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d.用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部,取出含有胚胎的子宮,置于無菌的培養皿上。
e.剔除胚胎周圍的包膜,將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f.漂洗胚胎,去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
公司向您推薦Primarker™小鼠卵巢成纖維細胞鑒定試劑盒的詳細說明:
產品名稱 | Primarker™小鼠卵巢成纖維細胞鑒定試劑盒 |
規格 | 6次/盒 |
貨號 | YS-X6987 |
細胞株的培養和傳代培養:
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養于含10%小牛血清和抗生素的培養液中,培養對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5% CO2 的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養,根據細胞生長特性,在適當的時候進行傳代,一般3~4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代:
直接離心后吸去培養上清液,用新鮮培養液稀釋懸浮細胞,一般按1:2-1:5 稀釋細胞后,分瓶繼續培養。?
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個; 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養皿1個,細胞培養瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
真菌/酵母NADP依賴性甘油醛-3-脫氫酶(NADP-Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase;NADP-GAPDH)活性光譜法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
食物乙酰舒泛(acesulfame K)含量高效相色譜法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
細胞ERK1/2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產 規格:20次
變性裂解 進口/國產 規格: 含有SDS
組織鈣調蛋白(CaM)活性酶連續循環比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
純化線粒體凍存(生物能量學保護) 進口/國產 規格:50毫升
體乙酰膽堿酯酶活性化學發光法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
載玻片細胞CREB蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產 規格:10/20次
細菌D-葡萄糖含量氧化法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
細胞CYTOCHROME C蛋白表達熒光定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:10/50 次
蘭花Knudson培養基 進口/國產 規格:500毫升溶/片劑
適配體(ADAPTER)連接試劑盒 進口/國產 規格:10次
Primarker™小鼠卵巢成纖維細胞鑒定試劑盒結晶紫染色規格:100ml
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae吳茱萸堿
葡萄孢 Botrytis sp.嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus
Dermokine蛋白(DMKN)重組蛋白英文名稱:Recombinant Dermokine (DMKN)
克氏檸檬酸培養基/Christensen Citrate Medium腸桿菌鑒別250克國產/進口
強化梭菌培養基/RCM梭菌的增菌培養和計數250克國產/進口
CRFK(貓腎細胞)植物桿菌 Lactobacillus plantarum
NCI-H596(人肺腺鱗細胞)5×106cells/瓶×2
BABL/C小鼠胚胎細胞釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
SOB瓊脂/SOB AgarBR250克國產/進口
地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis洛格酵母 Saccharomyces logos
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
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