細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

公司向您推薦PrimaCell™大鼠肺成纖維細胞試劑盒說明書的詳細說明：

細胞株的培養和傳代培養：
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養于含10％小牛血清和抗生素的培養液中，培養對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養，根據細胞生長特性，在適當的時候進行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代：
直接離心后吸去培養上清液，用新鮮培養液稀釋懸浮細胞，一般按1：2-1：5 稀釋細胞后，分瓶繼續培養。
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實驗操作步驟：
a．采用認可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。   
b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

組織半胱氨酸蛋白酶-5（PASE-5）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格：20次

載玻片細胞線粒體復合物III蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產 規格：10/20次

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PrimaCell™大鼠肺成纖維細胞試劑盒說明書3-氯聯分子式：188.65英文名稱：3- chloride號：2051-61-8分子量： C12H9Cl

7-氟-2-甲喹啉分子式：161.18英文名稱：7- -2- methyl group號：1128-74-1分子量： C10H8FN

酸吖分子式：115.56英文名稱：Acridine hydrochloride號：17784-47-3分子量： C13H9N·HCl

5-溴-2-甲-3-硝吡分子式：217.02英文名稱：5- -2- -3- nitro pyridine號：911434-05-4分子量： C6H5BrN2O2

2-溴-3-氯-5-三氟甲吡分子式：260.44英文名稱：2- -3- three f號：75806-84-7分子量： C6H2BrClF3N

聚乙英文名稱：PE分子式：分子量： [C2H4]n號：9002-88-4

糖精鈉英文名稱：Saccharin sodium分子式：205.17分子量： C7H4NNaO3S·xH2O號：82385-42-0

3-氯-1-丙英文名稱：3- -1-分子式：94.54分子量： C3H7ClO號：627-30-5

小白菊內酯英文名稱：White Chrysanthemum分子式：248.32分子量：C15H20O3號：20554-84-1

2-溴嘧分子式：158.98英文名稱：2- bromide號：4595-60-2分子量： C4H3BrN2

4,4'-二甲聯甲酰分子式：英文名稱：4,4'- two methyl group號：分子量：