當前位置:上海研生實業有限公司>>細胞培養>>細胞培養、鑒定試劑盒>> PrimaCell™小鼠胎兒真皮成纖維細胞試劑盒
培養細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產品說明書。
1.配制凍存培養基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度,計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
PrimaCell™小鼠胎兒真皮成纖維細胞試劑盒 | 6次/盒 | YS-X6751 |
?
細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
培養操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
血結合(酯化)膽固醇酶連續循環比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
TrpE融合蛋白擴增試劑盒 進口/國產 規格:10次
ISCOVE’S MDM培養基 進口/國產 規格:1/10升(片劑)
通用腺病毒骨架載體(pAdEasy-1) 進口/國產 規格:500納克
高效CHIP DNA分子克隆試劑盒 進口/國產 規格:10次
組織脂質比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
細菌半糖總含量酶連續循環反應比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
P21(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 進口/國產 規格:100微克
細胞培養污染性支原體M.hominis鑒定16S rDNAPCR擴增檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
細胞無機磷/游離離子比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
同位素核酸(酶切產物)蛋白結合甲基化干擾足跡法分析試劑盒 進口/國產 規格:10次
新生牛血清 進口/國產 規格:500毫升
PrimaCell™小鼠胎兒真皮成纖維細胞試劑盒三氟甲分子式:146.11英文名稱:Three fluorine toluene號:36015分子量: C7H5F3
3-羥-2,4,6-*(HTBA)英文名稱:3- hydroxy -2,4,6- three iodo benzoic acid (HTBA)分子式:515.81分子量: C7H3I3O3號:53279-72-4
亮綠SF淡黃英文名稱:Light green SF分子式:792.85分子量: C37H34N2O9S3Na2號:5141-20-8
固藍B英文名稱:Solid blue B分子式:475.47分子量: C14H12CI2N4O2#號:14263-94-6
N-(2-乙)-2-亞二乙(ADA)英文名稱:N- (2-) -2- two acetic acid (ADA)分子式:190.15分子量: C6H10N2O5號:26239-55-4
N-(乙酰)-2-乙烷磺(ACES)英文名稱:N- (acetaminophen) -2- amino acid (ACES)分子式:182.19分子量: C4H10N2O4S號:7365-82-4
叔丁氯鎂英文名稱:Tert butyl chloride分子式:116.873分子量: C4H9ClMg號:677-22-5
諾孕美特英文名稱:Norgestomet分子式:372.55分子量: C23H32O4號:25092-41-5
5,7-二溴-8-羥喹啉分子式:302.95英文名稱:5,7- dibromo -8- hydroxyquinoline號:521-74-4分子量: C9H5Br2NO
6-(氯甲)脲嘧分子式:160.56英文名稱:6- (CL) urea號:18592-13-7分子量: C5H5ClN2O2
顏料橙13英文名稱:Pigment orange 13分子式:623.49分子量: C32H24Cl2N8O2號:3520-72-7
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責,儀表網對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示:為規避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。