實驗操作步驟：
a．采用認可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。   
b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

公司向您推薦PrimaCell™大鼠腎成纖維細胞試劑盒規格的詳細說明：

細胞株的培養和傳代培養：
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養于含10％小牛血清和抗生素的培養液中，培養對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養，根據細胞生長特性，在適當的時候進行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代：
直接離心后吸去培養上清液，用新鮮培養液稀釋懸浮細胞，一般按1：2-1：5 稀釋細胞后，分瓶繼續培養。
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實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

石蠟切片游離膽固醇毛地黃皂苷法（DIGITONIN）舒爾茨間接染色試劑盒 進口/國產 規格：10次

石蠟切片組織衰老特異性早期脂褐素油性紅原位直接染色試劑盒 進口/國產 規格：50次

BJ5183-AD-1鈣轉感受態細菌 進口/國產 規格：1 X 100微升

50倍Dendhart核酸雜交封閉溶 進口/國產 規格：100毫升

細胞內氧化應激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（單線態氧氣） 進口/國產 規格：20次

DH5α電轉感受態細菌 進口/國產 規格：10 X 100微升

通用免疫化學封閉溶 進口/國產 規格：100毫升

冰凍切片組織衰老特異性脂褐素靛酚原位染色試劑盒 進口/國產 規格：50次

裂解VIII：細菌活性化蛋白制備溶 進口/國產 規格：20次

冰凍切片組織蛋白酶L（CATHEPSIN L）活性原位熒光染色檢測試劑盒 進口/國產 規格：20次

BrdU標記法組織冰凍切片細胞繁殖熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產 規格：10/20次

植物細胞可溶性總核蛋白粗提制備試劑盒 進口/國產 規格：20次

PrimaCell™大鼠腎成纖維細胞試劑盒規格擬人參皂苷F1l英文名稱：Human F1l分子式：801.01268分子量：C42H72O14號：

3-甲酸分子式：129.16英文名稱：3- piperidine formic acid號：498-95-3分子量： C6H11NO2

2--3-氯-5-三氟甲吡分子式：196.56英文名稱：2- amino -3- -5- three號：79456-26-1分子量： C6H4ClF3N2

3-Boc-氨甲分子式：214.3英文名稱：3-Boc- ammonia methyl piperidine號：142643-29-6分子量： C11H22N2O2

4,4'-二溴二砜分子式：376.06英文名稱：Two 4,4'- dibromo diphenyl sulfone號：2050-48-8分子量： C12H8Br2O2S

5-溴-2-吡分子式：283.89英文名稱：5- bromide -2-號：223463-13-6分子量： C5H3BrIN

4-啉分子式：102.14英文名稱：4- amino morpholine號：4319-49-7分子量： C4H10N2O

3,5-二溴-4-吡甲醛分子式：264.9英文名稱：3,5- dibromo -4- pyridine formaldehyde號：70201-42-2分子量： C6H3Br2NO

2,3-雙(4-氯)-5-氯四氮唑分子式：403.69英文名稱：Double 2,3- (4- chlorophenyl) -5- triphenyl tetrazolium chloride號：vc6分子量： C19H13Cl3N4

(S,S)-2-氮雜雙環[3,3,0]辛烷-3-羧芐酯英文名稱：(S, S) -2- azabicyclo [3,3,0] octane -3- carboxylic acid benzyl ester hydrochloride分子式：281.78分子量： C15H20ClNO2號：93779-29-4

3,5-二硝-4-氯三氟甲分子式：270.55英文名稱：3,5- two nitro -4- three f號：393-75-9分子量： C7H2ClF3N2O4

細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。