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細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
PrimaCell™大鼠膀胱成纖維細胞試劑盒說明書 | 6次/盒 | YS-X6792 |
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2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
培養操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
陳舊血紅細胞溶解 進口/國產 規格:500毫升
細胞脂質過氧化氫(H2O2)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
30%ACRYLAMIDE-BIS(29:1)溶 進口/國產 規格:500毫升
細胞培養低密度脂蛋白膽固醇(LDL-Cholesterol)酶連續循環比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
VEGF蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 進口/國產 規格:5次
食物纖維素酶解法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:10次
石蠟切片脂肪酸費斯克勒(Fischler)間接染色試劑盒 進口/國產 規格:10次
呼吸鏈依賴性純化線粒體氧化應激活性氧(ROS)高質熒光測定試劑盒 進口/國產 規格:20次
非同位素AP化學發光法DNA南方雜交試劑盒 進口/國產 規格:5次
石蠟切片神經元胞漿尼斯(NISSL)染色試劑盒 進口/國產 規格:50次
細胞B-RAF激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產 規格:20次
麻風桿菌(Leprosy Bacilli)染色試劑盒 進口/國產 規格:50次
PrimaCell™大鼠膀胱成纖維細胞試劑盒說明書2-乙并咪唑分子式:146.19英文名稱:2- ethyl benzimidazole號:1848-84-6分子量: C9H10N2
4-氟-7-硝并-2-氧雜-1,3-二唑(NBD-F)英文名稱:4- -7- -1,3- and -2- two (NBD-F)分子式:183.1分子量: C6H2FN3O3號:29270-56-2
溴鉀分子式:119英文名稱:Potassium bromide號:2139626分子量: KBr
對硝氯分子式:157.56英文名稱:Para nitro benzene號:100-00-5分子量: C6H4ClNO2
1,1'-(對二甲)雙(4,4'-二吡)二溴物分子式:576.34英文名稱:1,1'- (two of benzene methyl (4,4'-) - pyridine bromide two) two號:106867-97-4分子量: C28H24Br2N4
6-氟-4-羥喹啉分子式:163.15英文名稱:6- -4- hydroxy group號:391-78-6分子量: C9H6FNO
4-脲唑分子式:177.16英文名稱:4- phenyl urea號:15988-11-1分子量: C8H7N3O2
丙分子式:668.39英文名稱:Propidium iodide號:25535-16-4分子量: C27H34I2N4
2,4-二氯-6,7-二甲氧喹唑啉分子式:259.09英文名稱:2,4- two, -6,7- two, a號:27631-29-4分子量: C10H8Cl2N2O2
1,3,5-三[(4-三氟甲磺酰氧)-3-(*硅)]分子式:967.12英文名稱:1,3,5- three [(4- three) -3- (three methyl silicone) phenyl] benzene號:847925-63-7分子量: C36H39F9O9S3Si3
羅丹明123英文名稱:Luo Danming 123分子式:380.82分子量: C21H17ClN2O3號:62669-70-9
培養細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產品說明書。
1.配制凍存培養基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度,計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
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