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細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
PrimaCell™大鼠胃粘膜上皮細胞試劑盒規格 | 6次/盒 | YS-X6781 |
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2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
培養操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
Michel固著 進口/國產 規格:50毫升
載玻片細胞AKT蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產 規格:10/20次
酒類甲酸比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
Hollande固著 進口/國產 規格:50毫升
冰凍切片組織PARP蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產 規格:10/20次
pGADT7+目的基因 進口/國產 規格:酵母雙雜交獵物
20%Formalin固著 進口/國產 規格:50毫升
石蠟切片組織PAR-3蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產 規格:10/20次
pBADCE4.1+目的基因 進口/國產 規格:雙基因真核表達
血小板活化因子乙酰水解酶(PAF AH)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
載玻片細胞PAR-2蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產 規格:10/20次
全組織乙酰膽堿脂酶活性染色試劑盒 進口/國產 規格:10次
PrimaCell™大鼠胃粘膜上皮細胞試劑盒規格除蟲菊素I英文名稱:The I分子式:328.45分子量:C21H28O3號:121-21-1
2,2-雙(3--4羥)-六氟丙烷英文名稱:2,2- bis (3- amino -4 hydroxy phenyl) - six f分子式:366.26分子量: C15H12F6N2O2號:83558-87-6
紅花色素A英文名稱:Safflower Pigment A分子式:分子量:號:
(±)-吳茱萸堿英文名稱:(+) - evodiamine分子式:303.37分子量:C19H17N3O號:518-18-3
3,5-二甲異唑分子式:97.12英文名稱:3,5- two methyl號:300-87-8分子量: C5H7NO
2-乙酰呋分子式:110.11英文名稱:2- acetyl號:1192-62-7分子量: C6H6O2
3-(3-溴)吡分子式:234.092英文名稱:3- (3-) pyridine號:4422-32-6分子量: C11H8BrN
2-羥-3-硝-5-(三氟甲)吡分子式:208.09英文名稱:2- hydroxy -3- nitro -5- (three f) pyridine號:33252-64-1分子量: C6H3F3N2O3
2-嘧分子式:95.1英文名稱:2- amino group號:109-12-6分子量: C4H5N3
氨丙咪唑分子式:英文名稱:Ammonium group號:分子量:
堿性品綠英文名稱:Basic green分子式:364.91分子量: C23H25ClN2號:569-64-2
培養細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產品說明書。
1.配制凍存培養基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度,計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
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