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服務:
我們可以根據您的應用需要,比如在檢測范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本。并可提供免費代測。
產品名稱 | 人丙酮酸脫氫酶E1(PDH E1)ELISA檢測試劑盒 |
英文名稱 | Human pyruvate dehydrogenase E1 (PDH E1) ELISA Kit |
貨號 | YS-H11081 |
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試劑配制
1、酶聯板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Cy5標記的兔抗馬IgM 0.1mlRabbit Anti-horse IgM/Cy5
Alexa Fluor 647標記的羊抗豚鼠IgG 0.1mlGoat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647
Alexa Fluor 350標記的小鼠抗人IgG 0.1mlMouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 350
Cy5標記的小鼠抗大鼠IgG 0.1mlMouse Anti-rat IgG/Cy5
Alexa Fluor 488標記的兔抗親和素 0.1mlRabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 488
生物素標記的兔抗雞IgM 0.1mlRabbit Anti-chicken IgM/Bio
生物素標記的兔抗羊IgM 0.5mlRabbit Anti-Goat IgM/Bio
Cy5.5標記的兔抗人IgG 0.1mlRabbit Anti-human IgG/Cy5.5
PE標記的兔抗猴IgM 0.1mlRabbit Anti-MK IgM/PE
Alexa Fluor 555標記的兔抗大鼠IgM 0.1mlRabbit Anti-rat IgM/Alexa Fluor 555
辣根過氧化物酶標記的驢抗人IgG 0.1mlDonkey Anti-human IgG/HRP
β淀粉樣肽1-16(多肽蛋白) 0.5mgBeta-Amyloid(1-16)
5-羥色胺受體1A(多肽) 0.5mg5-HTR1A (5-HT1A (5-hydroxytryptamine/serotonin receptor 1A; 5HT1a; ADRBRL1; ADRB2RL1; HTR1A)
血小板內皮細胞黏附分子-1(抗原) 0.5mgCD31 (PECAM-1)
人丙酮酸脫氫酶E1(PDH E1)ELISA檢測試劑盒50g D- 泛酸鈣 D-Pantothenic Acid Hemicalcium Salt 4℃避光保存
5g 木瓜蛋白酶 Papain 4℃保存
25g 多聚甲醛 Paraformaldehyde 密封干燥保存
100mg 果膠酶 Pectinase( Aspergillus Niger) 4℃保存
100mg 果膠酶 Y-23 Pectolyase Y-23 密封干燥保存
25g 果膠 Pectin 室溫干燥保存
250g 聚乙二醇 12000 PEG12000 室溫保存
250g 聚乙二醇 20000 PEG20000 室溫保存
250g 聚乙二醇 3350 PEG 3350 室溫陰涼干燥保存
250g 聚乙二醇 4000 PEG 4000 室溫陰涼干燥保存
250g 聚乙二醇 6000 PEG6000 室溫陰涼干燥保存
250g 聚乙二醇 8000 PEG8000 室溫保存
1Mu 青霉素 G 鉀鹽 Penicillin G K Salt 室溫干燥保存
操作步驟:
1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。
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