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培養細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產品說明書。
1.配制凍存培養基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度,計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
產品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,提供的人源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩定。在技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
發貨:客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。科技提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發貨的新鮮細胞還包含:1、發貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養基;2、說明書及注意事項;3、科技售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
大鼠小腸粘膜上皮細胞說明書 | 5×105 | YS-X6557 |
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細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
培養操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
兔血漿異槲皮苷 98%D-甘露醇發酵管(枯草芽孢桿菌)pUNO1-hCXCR3a
革蘭氏染色液D-(-)-奎尼酸 98%酸鹽(枯草芽孢桿菌)pUNO1-hCXCR4b
苯胺藍-DNA 瓊脂金絲桃苷 分析標準品,≥98%馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)pUNO1-hCXCR5
BCYE 瓊脂基礎槲皮素 97%CCFA瓊脂基礎pUNO1-hCXCR6
BCYE-Cys 瓊脂白藜蘆醇 99%大豆胰酪蛋白胨肉湯(含亞硫酸鐵)pUNO1-hCXCR7
培養基吳茱萸次堿 98%CAYE培養基pUNO1-hCYLDb
L-半胱氨酸鹽酸鹽溶液L-鼠李糖,一水 99%乳桿菌選擇性培養基pUNO1-hDAD1
GVPC 瓊脂基礎(+)-蕓香苷,三水 97%慶大霉素(100IU)和亞碲酸鉀(1mg)混合液pUNO1-hDAK
GVPC 瓊脂添加劑迷迭香酸 97%胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉湯(TGPY)pUNO1-hDAP12a
Page′鹽左旋延胡索素 分析標準品,≥98%(HPLC)厭氧卵黃瓊脂基礎pUNO1-hDCN
大鼠小腸粘膜上皮細胞說明書濃度范圍:1.21-3.58(mg/L),分析標準品Gibberllin A4+7 赤霉素GA4+7四苯酐Monkey IL-2(Interleukin 2) ELISA Kit
Monkey IL-4(Interleukin 4) ELISA Kit
水質氮氧化物(水劑)標樣 分析標準品Hygromycin B 潮霉素B可可粉Monkey IL-6(Interleukin 6) ELISA Kit
Monkey IL-8(Interleukin 8) ELISA Kit
對標準溶液 1000μg/ml,溶劑:醇Hygromycin B 潮霉素B Germany鷹嘴豆芽素AMonkey IL-9(Interleukin 9) ELISA Kit
Monkey INS(Insulin) ELISA Kit
硝酸鹽氮標準溶液 500mg/L,不確定度2%Ionomycin calcium salt 鈣離子霉素通用型脫色劑Monkey KIM-1(Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit
Monkey LEP(Leptin) ELISA Kit
水質總有機碳標樣 濃度范圍:(24.4±1.5)mg/l分析標準品Ionomycin calcium salt 鈣離子霉素通用氨氮去除劑Monkey LEPR(Leptin Receptor) ELISA Kit
Monkey MCP-1(Monocyte Chemotactic Protein 1) ELISA Kit
中有機磷農藥混合標樣分析標準品Ivermectin 依維菌素四苯酐Monkey MIP-3α(Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha) ELISA Kit
Monkey MMP-2(Matrix Metalloproteinase 2) ELISA Kit
醇中有機磷農藥混合標樣 分析標準品Kanamycin 硫酸卡那霉素 D-對砜基苯絲氨酸酯Monkey MYO(Myoglobin) ELISA Kit
Monkey NGF(Nerve Growth Factor) ELISA Kit
標準溶液776mg/L,溶劑:醇Kanamycin 硫酸卡那霉素 Amresco檳榔堿Monkey NTXI(Cross Linked N-opeptide of Type I Collagen) ELISA Kit
Monkey PAI1(Plasminogen Activator Inhibitor 1) ELISA Kit
鉀標準溶液1.35-4.29mg/L,水質分析用Kanamycin 硫酸卡那霉素 Amresco藍莓粉Monkey PDGF-BB(Plaet Derived Growth Factor-BB) ELISA Kit
Monkey Pg(Progesterone) ELISA Kit
鉀標準溶液 500mg/L,溶劑:水Kanamycin 硫酸卡那霉素 Amresco堿式氯化鋁Monkey PTH(PaRathyroid Hormone) ELISA Kit
Monkey RANTES(Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit
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