中文名稱  李斯特菌溶胞素抗體
英文名稱  Anti-Listeriolysin
濃 度： 1mg/1ml

規 格 0.2ml/200μg

抗體來源 Rabbit

克隆類型 polyclonal

交叉反應 Listeria monocytogenes

產品類型 一抗

研究領域 微生物學 細菌及

蛋白分子量 predicted molecular weight：

55kDakDa  

性 狀 Lyophilized or Liquid

免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human Listeriolysin

亞 型 IgG

純化方法 affinity purified by Protein A

儲 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

產品應用 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500

別 名 Listeriolysin; hly; hlyA; lisA; LLO; Thiol activated cytolysin; listeriolysin precursor.

抗體的熒光標記法：

（一）基本原理

賴氨酸殘基的游離e-氨基可與FITC(其激發波長為492nm,發射光波長為525nm)共價結合。與FITC結合的抗體可用為特異性的探針,以測定細胞相應抗原的存在。FITC具有很高的量子產量(發射光與吸收光的比值,0.85)形成的偶聯物的穩定性很好。

（二）儀器和試劑

1.待偶聯抗體；

2.碳酸氫鈉緩沖液；

3.疊氮鈉；

4.庵氰酸熒光素；

5.電磁攪拌器。

抗體的制備過程：

1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫動物：常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。

4. 免疫血清的純化與鑒定：得到的抗血清需要進一步的純化，利用偶聯了抗原的親和柱進行層析，具有高效，特異性強，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。

5. 免疫血清的保存：抗體一般比較穩定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。

抗體分子標記技術：

（一）原理

當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。

（二）準備

1.試劑

經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應終止緩沖液；

2.儀器

凝膠過濾柱；￥-記數器；玻璃纖維濾。

（三）操作要點

1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行；

2.如果氧化反應損傷蛋白質，可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。

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