服務(wù)流程：

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

組成及試劑配制:

1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

綿羊胰腺再生蛋白1α(REG1α)重組髓鞘少樹突膠質(zhì)糖蛋白1-125

綿羊VIII型膠原α1(COL8α1) 雙微體2癌因抗原

綿羊踝蛋白(TLN)硝唑偶聯(lián)雞卵白蛋白

綿羊早期生長應(yīng)答蛋白3(EGR3)三聚與血藍(lán)蛋白偶聯(lián)物

綿羊抗磷脂酰絲氨酸抗體(APSA)  三聚與牛血清白蛋白偶聯(lián)物

綿羊肌球蛋白重鏈1(MYH1) 與牛血清白蛋白偶聯(lián)物

綿羊核孔蛋白133kda(NUP133)髓鞘少樹突膠質(zhì)糖蛋白(活性多肽)

綿羊磷酸肌-3-激酶(PI3K)冰/與牛血清蛋白偶聯(lián)物

綿羊酰輔酶A(A-CoA) 辣根過氧化物酶標(biāo)記三聚

綿羊抗角蛋白抗體(AKA) 三聚偶聯(lián)雞卵白蛋白

綿羊雙腎上腺皮質(zhì)激素樣激酶1(DCLK1)三聚偶聯(lián)牛血清白蛋白

綿羊α-胞襯蛋白(SPTAN1) 三聚偶聯(lián)牛IgG

綿羊因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3(SOCS3)硝唑偶聯(lián)血藍(lán)蛋白

綿羊肝臟/紅酮酸激酶(PK)三聚與雞卵白蛋白偶聯(lián)物

綿羊肝臟膠原凝集素1(CLL1) 神經(jīng)元特異性烯化酶抗原

綿羊抗磷脂抗體(APA) Nogo-66 (1-40)
貓種特異性基因檢測試劑盒（熒光PCR法）Claudin-11 peptide  少突膠質(zhì)跨膜蛋白抗原環(huán)戊 99%

CLDN1(Claudin 1)C-term  緊密連接蛋白1抗原(C端)N,N-二氯酰  98%

COX-1 (Prostaglandin-endoperoxide synthase-1)  前列腺素氧化環(huán)化酶1抗原氯酸異丁酯 98%

CPT1A peptide  肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1A多肽抗原氯酸異酯  97%

CRMP2/Dpysl2(collapsin response mediator protein-2)  二氫嘧啶酶樣2CRMP2抗原4-環(huán)己酮 98%

CRLR/CALCRL(calcitonin receptor like precursor)  降鈣素受體樣蛋白抗原氯酸-4-硝芐酯 97%

cRaf/Raf1(c-raf 1)  cRaf/Raf1抗原吡唑 99%

MEK1/MAPKK1(mitogen activated protein kinase kinase 1)  MEK1/MAPKK1抗體(N-端)1,5-戊二 97%
反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。