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操作步驟:
1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。
服務:
我們可以根據您的應用需要,比如在檢測范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本。并可提供免費代測。
產品名稱 | 人腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)ELISA檢測試劑盒 |
英文名稱 | Human brain natriuretic peptide / brain natriuretic peptide (BNP) ELISA Kit |
貨號 | YS-H11864 |
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試劑配制
1、酶聯板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
辣根過氧化物酶標記的羊抗大鼠IgG 0.1mlGoat Anti-rat IgG/HRP
PE-CY5標記的羊抗人IgG 0.1mlGoat Anti-human IgG/PE-CY5
PE-CY5標記的小鼠抗羊IgG 0.1mlMouse Anti-Goat IgG/PE-CY5
Alexa Fluor 555標記的小鼠抗豚鼠IgG 0.1mlMouse Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555
Alexa Fluor 647標記的兔抗牛IgM 0.1mlRabbit Anti-Bovine IgM/Alexa Fluor 647
Alexa Fluor 555標記的兔抗羊IgG 0.1mlRabbit Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 555
Alexa Fluor 647標記的兔抗馬IgG 0.1mlRabbit Anti-horse IgG/Alexa Fluor 647
PE標記的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1mlRabbit Anti-mouse IgG-Fc/PE
Cy3標記的兔抗小鼠k鏈 0.1mlRabbit anti-mouse Kappa light chain/Cy3
Alexa Fluor 647標記的兔抗長爪沙鼠IgG 0.1mlRabbit anti-MG IgG/Alexa Fluor 647
Cy5.5標記的驢抗豚鼠IgG 0.1mlDonkey Anti-Guinea pig IgG/Cy5.5
重組乙肝病毒e抗原 100ugrHBeAg(Hepatitis B Virus E Antigen protein)
擬南芥ACA11蛋白多肽抗原 0.5mgACA11 peptide
凋亡調節基因之一(多肽抗原) 0.5mgFLIP S/L peptide
人腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)ELISA檢測試劑盒大鼠維甲酸受體應答蛋白2(RARRES2)ELISA試劑盒 英文名: RARRES2 ELISA Kit
大鼠微纖絲相關糖蛋白3(MFAP3)ELISA試劑盒 英文名: MFAP3 ELISA Kit
大鼠微管相關蛋白2(MAP-2)ELISA試劑盒 英文名: MAP-2 ELISA Kit
大鼠網膜素(omentin)ELISA試劑盒 英文名: omentin ELISA Kit
大鼠晚期氧化蛋白產物(AOPP)ELISA試劑盒 英文名: AOPP ELISA Kit
大鼠晚期糖基化終末產物受體(RAGE)ELISA試劑盒 英文名: RAGE ELISA Kit
大鼠晚期糖基化終末產物(AGEs)ELISA試劑盒 英文名: AGEs ELISA Kit
大鼠晚期糖基化終末產物(AGE)ELISA試劑盒 英文名: AGE ELISA Kit
大鼠晚期糖基化端產物特異受體(AGER)ELISA試劑盒 英文名: AGER ELISA Kit
大鼠脫氧膠原啶交聯(DPD)ELISA試劑盒 英文名: DPD ELISA Kit
大鼠脫氧啶酚/脫氧啶啉(DPD)ELISA試劑盒 英文名: DPD ELISA Kit
大鼠脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA試劑盒 英文名: DHEA-S ELISA Kit
大鼠脫氫表雄酮S7(DHEA-S7)ELISA試劑盒 英文名: DHEA-S7 ELISA Kit
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