【 產品名稱 】雌二醇（E2）含量ELISA測試盒規格

【 檢測方法 】ELISA

【 包裝規格 】96T

【 產品編號 】YS-S013712

【 儲存條件與保質期 】2-8°C保存， 公司產品僅用于科研有效期見試劑盒外標簽。

下列圖文詳解接種步驟：

實驗中血漿的采集、處理和保存；

1、 真空采血針采集2ml新鮮血液，加入無菌試管中；

2、 按1:9加入抗凝劑（EDTA、草酸鈉、肝素、枸櫞酸鈉），30分鐘內于冰上分離血漿以減少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集）；

3、 將采集血液用離心機4℃，2500rpm離心5min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

4、 取上清。 分裝凍存備用，

2-8℃下，可放置保存24-48小時；

-20℃下，可放置保存1個月；

-70℃下，可放置保存6個月；

5、 根據你的實驗需要，取適量上清夜進行各種ELISA測定。 請注意指標說明書上對于抗凝血劑是否有特殊要求，建議使用EDTA。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。

實驗中各類組織勻漿（容易勻漿的組織）的采集、處理和保存；（需要測蛋白濃度）

1、 采集組織，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，剔除附屬的結締組織，稱取組織塊。

2、 用移液管量取0.1M PBS或者用0.86％冷生理鹽水，勻漿介質或生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的9倍，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時操作要在冰水浴中進行，將盛有組織 的小燒杯放入冰水中）。

3、 勻漿的方式有多種：

a) 手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的1/3勻漿介質或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進行勻漿，左手持勻漿管將下 端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉動研磨數十次（6～8分鐘），充分研碎，使組織勻漿化。

b) 機器勻漿：用組織搗碎機10000～15000r/min上下研磨制成10％組織勻漿，也可用內切式組織勻漿機制備（勻漿時間10秒/次，間隙30秒，連續3～5次，在冰水中進行），皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。

4、 將制備好的10％勻漿用離心機4℃，3000rpm離心15min，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

5、 取上清。 分裝凍存備用，

2-8℃下，可放置保存24-48小時；

-20℃下，可放置保存1個月；

-70℃下，可放置保存6個月；

6、 根據你的實驗需要，取適量上清夜進行各種ELISA測定。

注意事項：

①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

④底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

操作流程：

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

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