參數規格：

產品名稱：PAT基因檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）

產品貨號：YS-P014128

產品規格：48T  0.1PCR管

產品分類：PCR檢測試劑盒

產品運輸：低溫運輸

產品保存：-20℃保存

產品有效期：一年

產品特點：本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。

特點優勢：

1.   特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過TIANDZ及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。

2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。

3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。

5.   優勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐

的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
實驗過程：

一、試劑準備

1. DNA模板

2．公司產品僅用于科研對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。

2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

犬氨端前腦鈉素(NT-proBNP)堿性磷酸酶標記生物素

犬胱抑素C(Cys-C)堿性磷酸酶標記親合素

犬心肌肌鈣蛋白I(cTn-I/TNNI3)堿性磷酸酶標記羊抗人IgA

犬胰高血糖素樣肽2(GLP-2)堿性磷酸酶標記兔抗人IgA

犬E選擇素(SELE) 堿性磷酸酶標記的蛋白A

殺菌肽A(CecA)  生物素化羊抗人IgA

殺菌肽B(CecB)  生物素化兔IgG

殺菌肽D(CecD)  生物素化小鼠IgG

性休克綜合征素1(TSST-1) 熒光素標記兔抗FITC

環孢素A(CsA) 紅色熒光素羅丹明標記鏈霉親和素

維生素A(VA)羅丹明標記兔IgG(流式同型對照)

維生素B1(VB1)羅丹明標記小鼠IgG(流式同型對照)

維生素B6(VB6)羅丹明標記羊IgG(流式同型對照)

葉酸/維生素B9(FA/VB9) 羅丹明標記大鼠IgG(流式同型對照)

維生素B12(VB12)熒光素標記親合素

維生素C(VC)熒光素標記鏈霉親和素
PAT基因檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）GRM2/GLUR2 (Glutamate Receptor Metabotropic 2)  促代謝型谷氨酸受體2抗原2-溴 99%

GRP78(glucose regulated protein 78)  葡萄糖調節蛋白78抗原（熱休克蛋白70蛋白5）叔丁 97%

GSK-3 Alpha (Glycogen Synthase Kinase-3 alpha)  葡萄糖合成激酶-3α抗原(多肽抗原)2-溴吡啶 98%

phospho-GSK-3 Beta(pSer9)  磷酸化葡萄糖合成激酶-3β抗原炔酸叔丁酯 98%

phospho-GSK3 Alpha/ Beta(alpha + beta)(phospho Tyr279 + Tyr216)  磷酸化葡萄糖合成激酶3α/β抗原3-溴化鎂 0.5 M THF溶液

GSR/GRase(glutathione reductase)  谷胱甘肽還原酶抗原2-丁炔-1- 98%

A/H1N1-M2 Human(Avian influenza Matrix Protein-2 Human)  A型人流感病H1N1-M2蛋白多肽5-溴-3-吡啶 97%

A/H1N1-M2 Swine(Avian influenza Matrix Protein-2 Swine)  A型豬流感病H1N1-M2蛋白2-芐氧 98%