參數規格：

產品名稱：pFMV35S基因檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）

產品貨號：YS-P014135

產品規格：48T  0.1PCR管

產品分類：PCR檢測試劑盒

產品運輸：低溫運輸

產品保存：-20℃保存

產品有效期：一年

產品特點：本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。

特點優勢：

1.   特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過TIANDZ及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。

2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。

3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。

5.   優勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐

的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
實驗過程：

一、試劑準備

1. DNA模板

2．公司產品僅用于科研對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。

2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

人白介素2(IL-2)人免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ

人白介素4(IL-4)大鼠抗紅抗體

人白介素6(IL-6)人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅲ

人白介素10(IL-10)魚卵黃高磷蛋白

人白介素17(IL-17)兔核因子κB亞p65親和肽

人γ干擾素(IFN-γ)型肝炎二對半全套

人腫瘤壞死因子α(TNF-α)大鼠CD3分子

人轉化生長因子β1(TGF-β1) 小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗體

人血管內皮生長因子(VEGF-A) 型肝炎二對半全套（立可讀）

人瘦素(LEP)型肝炎表面抗原

人B淋巴瘤因子2(Bcl-2)型肝炎表面抗體

人尿微量白蛋白(MAU)型肝炎e抗原

人促黃體生成激素(LH)型肝炎e抗體

人腎素(REN)型肝炎核心抗體

人C-肽(C-P)型肝炎表面抗原

人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)型肝炎表面抗體
pFMV35S基因檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）BCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein)  癌耐藥相關蛋白（抗原）氫化奎尼定 1,4-(2,3-二氮雜萘)二 95%

Hrasls3/HREV107(HRAS like suppressor 3)  HRAS樣抑制因子3抗原3,3-二-1- 95%

HSP47(Heat shock protein-47)  熱休克蛋白-47抗原色標GStandard for GC，≥99.5% (GC）

HSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha )  熱休克蛋白90α抗體N,N-二硅烷 98%

HSP-105 (heat sock protein-105)  熱休克蛋白HSP105抗原3,5-二溴吡啶 98%

HtrA2/Omi peptide  絲氨酸蛋白酶/線粒體絲氨酸蛋白酶多肽抗原3-炔吡啶 98%

IAA/BSA  吲哚-3-酸偶聯牛血清白蛋白3-炔噻吩 97%

Iba-1(Ionized calcium bindingadaptor molecule-1)  離子鈣接頭蛋白抗原1-炔環戊 97%