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閱讀:98發布時間:2017-05-18
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人白介素8(IL-8)ELISA試劑盒檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心法。用抗人IL-8抗體包被于酶標板上,實驗時標本或標準品中的IL-8
會與包被抗體結合,游離的成分被洗去。依次加入*化的抗人IL-8抗體和辣根過氧化物酶標
記的親和素。抗人IL-8抗體與結合在包被抗體上的人IL-8結合、*與親和素特異性結合而形
成免疫復合物,游離的成分被洗去。加入發光底物混合液,發光底物在辣根過氧化物酶的催化下
發出熒光,用化學發光免疫分析儀測定化學發光值(RLU),IL-8濃度與化學發光值之間呈正相
關,通過繪制標準曲線求出標本中IL-8的濃度。
人白介素8(IL-8)ELISA試劑盒樣品收集:
1. 血清:全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,收集
血液的試管應為一次性的無熱原,無內毒素試管。
2. 血漿:抗凝劑*使用EDTA.Na2,樣品采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘,取上清即可
檢測。避免使用溶血,高血脂樣品。
3. 細胞培養上清:取細胞培養上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。
4. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,以去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞
會影響測量結果),稱重后將*碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量
體積比,比如1g的組織樣本對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記
錄。*在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂
解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分
鐘,取上清檢測。
5. 其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測
6. 樣品應清澈透明,懸浮物應離心去除。
7. 樣品收集后若不及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃/-80℃冰箱內,避免反復凍融,
1-6月內檢測,4℃保存的應在1周內進行檢測。
8. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值,請根據人白介素8(IL-8)ELISA試劑盒實際情況,做適當倍數稀釋(建議先
做預實驗,以確定稀釋倍數)。
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