BT-474細胞
細胞介紹：
E. Lasfargues和W.G. Coutinho從一個實心的浸潤性導管癌中分離到了BT-474細胞株。
細胞培養步驟：
1)培養基及培養凍存條件準備：
1.準備 RPIVM-1640 培養基(RPIVM-1640:GIBCO,貨號 31800022,添加 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸鈉O.llg八)，90%;優質胎牛血清，10%。
2. 培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱 濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%*培養基，10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
2)細胞處理：
復蘇細胞：將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或 細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢 查細胞密度。
細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37°C培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的 新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量*，細胞變圓脫落后，加入約lml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加1〇%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走)，加入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入1〇%DMSO后進行凍 存。
注意事項：
收到細胞后，若發現干冰己揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
細胞特性：
1)來源：導管癌
2)形態：上皮細胞樣
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
運輸和保存：使用T25瓶充液發送活細胞。收到細胞后，請先在顯微鏡下檢查細胞生長狀態，并將T25瓶置于培養箱約6h或過夜后，再次檢查細胞狀態。若狀態良好，可按照以下細胞培養步驟進行細胞后續處理操作。若發現可疑污染物，請及時與我們取得。
細胞用途：僅供科研使用。
