BT-549細胞
細胞介紹：
來源組織是一個狀侵入性導管瘤，7個局部淋巴結中3個己有轉移。建立的細胞是多態性的，包括上皮細胞樣組分和多核巨細胞。向培養基中分泌粘液素樣物質。
細胞培養步驟：
1)培養基及培養凍存條件準備：
1.準備 RPIVM-1640 培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091);北美胎牛血清 (United States, GIBCO，貨號 16000-044)，10%;添加 0.023u/mL 胰島素；雙
抗1%。
2.培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
2)細胞處理：
1.復蘇細胞：將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中 培養，補加培養基至6ml。
2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
BT-549細胞對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口lm丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37°C培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2ml*培養基 終止消化。輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加l-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中。
3.細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml*，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數量分配到凍存管中，注意凍存 管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項：
收到細胞后，若發現干冰己揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
細胞特性：
1)來源：導管癌
2)形態：上皮細胞樣
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
運輸和保存：可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式：（1)干冰運輸，收到后 立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2)存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
細胞用途：僅供科研使用。
