中國倉鼠卵巢細胞(CTLA4Ig-24)
細胞介紹
CHO 細胞以人 CTLA-4 基因細胞外結構域序列和人IgCgamma1的絞鏈區，CH2和CH#區序列的融合結構轉染，構建了這株細胞。它們表達融合蛋白(CTLA4Ig)。
細胞特性
1）來源：中國倉鼠卵巢
2）形態 ：可貼壁生長（上皮細胞樣），也可懸浮生長（圓球形）
3）含量：>1x10 6個/mL
4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規格：T25 瓶或者1mL凍存管包裝運輸和保存：使用含有優質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入*使用的培養基后至10cm培養皿或者T25培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
中國倉鼠卵巢細胞(CTLA4Ig-24)細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養步驟
一． 培養基及培養凍存條件準備：
培養條件：貼壁生長時，選擇DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO31.5g/L, 添加0.2 mM*,0.001mM氨甲蝶呤)，90%；優質胎牛血清，10%。[MTX是基因DHFR產物的抑制物。當培養基中存MTX時，MTX可滲入細胞內與DHFR蛋白結合，使核苷酸的合成受阻。但是DHFR基因連同其附近幾千KB的DNA還會擴增以滿足核苷酸合成的需要。理論上MTX濃度越大，DHFR基因擴增越多，與 DHFR基因連鎖的目的蛋白基因也表達得越多]懸浮培養時，請使用懸浮生長培養基，培養基為：EX-CELLCD-CHOCHOSerum-freeMedium,ChemicallyDefined(Sigma-Aldrich,貨號：24361C)添加物：L-*（Sigma-Aldrich,貨號：G8540-25G）Anti-ClumpingAgent(Gibco，貨號：01-0057AE)備注 ：CD-CHOCHOSerum-freeMedium請按照培養基配制說明書配制，L-*配制濃度為 200mM，工作濃度為8mM（即稀釋25倍，如500mlCHOSerumfreeMedium中添加20ml200mML-*，抗結團劑使用為1%，即 500mlCHOSerum-freeMedium 中添加5ml抗結團劑）
1）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
2）凍存液：90%*培養基（貼壁生長凍存時或90%懸浮培養基（懸浮生時），10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二． 細胞 處理 ：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量*，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍
存。
中國倉鼠卵巢細胞(CTLA4Ig-24)注意事項：
1.收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
2.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
