二氫*還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(CHO/DHFR)
細胞介紹
該細胞為二氫*還原酶缺陷細胞。在沒有HT(次黃嘌呤-胸腺嘧啶）時細胞會死亡。細胞培液中加氨甲喋呤可以防止對藥物低抗性的回變細胞的生長。
細胞特性
1)來源：中國倉鼠
2)形態：貼壁生長時，呈上皮細胞樣。
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝運輸和保存：可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式：（1)干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2)存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
二氫*還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(CHO/DHFR)細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養步驟
1)培養基及培養凍存條件準備：
1.準備IMDM培養基(GIBCO,貨號12200036);優質胎牛血清，15%，雙抗1%;用于表達蛋白時，也可使用懸浮培養基，使細胞懸浮生長。
2. 培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
2)細胞處理：
1.復蘇細胞：將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將
細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37°C培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄，補加l-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3.細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml*，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數量分配到凍存管中，注意凍管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
二氫*還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(CHO/DHFR)注意事項：
收到細胞后，若發現干冰己揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
