小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14(MC3T3E1Subclonel4)
細胞介紹
從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細胞系中分離出一系列亞克隆。從含抗壞血酸培養基生長的成骨細胞中選擇高或低成骨細胞分化、礦化的亞克隆。MC3T3亞克隆4(ATCCCRL-2593)和MC3T3亞克隆14(ATCCCRL-2594)在抗壞血酸和3到4mM無機磷酸鹽中生長表現出高水平的成骨細胞分化。它們10天后形成一個礦化良好的細胞外基質（ECM)。MC3T3亞克隆24 (ATCCCRL-2595)和MC3T3 亞克隆30(ATCCCRL-2596)在抗壞血酸中生長表現出很差的成骨細胞分化。不形成 ECM，可以作為亞克隆4和14的陰性對照。礦化的亞克隆選擇的表達作為成骨 細胞標記的mRNA，及唾液酸糖蛋白(BSP)，骨鈣素(OCN)，和甲狀旁腺激素/甲狀 旁腺激素相關蛋白受體的mRNA。高或者低的分化潛能的亞克隆在培養中生產出 相似數量的膠原質，表達可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfal，一種成骨 細胞相關轉錄因子。植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亞克隆形成與骨類似的 形成小骨的編織骨，低分化細胞只是產生纖維組織。這些細胞系是研究體外成骨 細胞分化的好模型，尤其是ECM信號。它們和原代培養顱頂成骨細胞的行為類 似。
細胞特性
1)來源：顱頂骨
2)形態：成纖維細胞
3)含量：>lxl06個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
運輸和保存：可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式：（1)干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2)存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14(MC3T3E1Subclonel4)細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備：
1)準備MEMa培養基(MEM a，GIBCO，貨號12561-056);北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，10%。
2) 培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液：90%*培養基，10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
1. 復蘇細胞：將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入l0cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37°C培
養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養液后吹勻。
將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3.細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量*，細胞變圓脫落后，加入約lml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14(MC3T3E1Subclonel4)注意事項：
收到細胞后，若發現干冰己揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
