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腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)板正確使用方法

時(shí)間:2017-9-1閱讀:324
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不同的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)密度不同,想知道細(xì)胞密度,就要在細(xì)胞培養(yǎng)之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),下面為大家詳情解說一下細(xì)胞計(jì)數(shù)板正確使用方法:

1.視待測(cè)菌懸液濃度,加無菌水適當(dāng)稀釋(斜面一般稀釋100倍),以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。 

2.取潔凈的細(xì)胞計(jì)數(shù)板一塊,在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。 

3.靜置片刻,使細(xì)胞沉降到計(jì)數(shù)板上,不再隨液體漂移。將細(xì)胞計(jì)數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺(tái)上夾穩(wěn),先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近,觀察時(shí)應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。

4.計(jì)數(shù)時(shí)若計(jì)數(shù)區(qū)是由16個(gè)大方格組成,按對(duì)角線方位,數(shù)左上、左下、右上、右下的4個(gè)大方格(即100小格)的菌數(shù)。如果是25個(gè)大方格組成的計(jì)數(shù)區(qū),除數(shù)上述四個(gè)大方格外,還需數(shù)*1個(gè)大方格的菌數(shù)(即80個(gè)小格)。為了保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,避免重復(fù)計(jì)數(shù)和漏記,在計(jì)數(shù)時(shí),對(duì)沉降在格線上的細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)應(yīng)有統(tǒng)一的規(guī)定。如菌體位于大方格的雙線上,計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線,以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細(xì)胞計(jì)入本格,本格的下線和右線上的細(xì)胞按規(guī)定計(jì)入相應(yīng)的格中。見下圖:即本格中計(jì)數(shù)細(xì)胞為3個(gè)。

5.對(duì)于出芽的酵母菌,芽體達(dá)到母腫瘤細(xì)胞大小一半時(shí),即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算。每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2-3次(每次數(shù)值不應(yīng)相差過大,否則應(yīng)重新操作),按公式計(jì)算出每mL(g)菌懸液所含細(xì)胞數(shù)量。 

6.測(cè)數(shù)完畢,取下蓋玻片,用水將細(xì)胞計(jì)數(shù)板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干,放入盒內(nèi)保存。
100277-200702    2-8℃,避光    含量測(cè)定    大豆油       200mg
100278-200402    常溫,避光    含量測(cè)定    對(duì)羥基苯甲酸甲酯    50mg
100279-200502    常溫,避光    含量測(cè)定    *    100mg
100280-201002    常溫,避光    含量測(cè)定    *    100mg
腫瘤細(xì)胞

 

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