干細胞轉染的開始——在轉染前12小時，將細胞分種于培養板中。在細胞達到50-80%的融合率時開始轉染，這樣就可以使它們在實驗結束時達到接近的融合。細胞對轉染復合物的攝取通常在0.5-6小時的時間內完成。

轉染是否成功的影響因素很多，如需要轉染的細胞類型（對于困難的細胞系尤其如此），需要被轉染的分子（DNA、RNA、寡核苷酸、蛋白質），轉染試劑等。但無論在何種情況下，轉染的成功均取決于轉染效率、低細胞毒性以及重現性這幾個要素。以下是幫大家搜集的關于細胞轉染的一些時間方面的問題及解答。

了解一下大家做細胞轉染時的幾個小細節：

1、對于293、293T這種貼壁不是很緊的細胞系，大家都是分了細胞之后多長時間做轉染呢？或者細胞長到那種密度做轉染呢？

2、轉染之后大家都是多久收細胞呢？或者是多大密度收細胞呢？

3、轉染之后的細胞如果很長時間不收，例如48h~72h不收細胞，轉進去的外源基因還有沒有表達呢？表達量怎么樣呢？

答：1, 鋪板24-48轉染 主要看你鋪的密度 想24H的話可以1W每孔

     2，脂質體轉染24H夠了，不過我們做的時候不收細胞，直接做flipr

     3, 48H還沒神馬問題的，72就不知道了

問：想在鋪板之后16h或者更短的時間內做轉然可以嗎？用的是維格拉斯的VigoFect脂質體？

答： 細胞鋪的密一點就行了，轉染的時間根據細胞的密度吧，我一般5000細胞每孔種入24孔板。待細胞長到60——70%的時候開始轉染，這個看細胞系，有的細胞長的快，種完后需要的時間短些。轉染完后我們做luciferase，都是24小時后收取細胞。

對于細胞轉染，一般在細胞中期轉染，轉染效率會相對高一些。這個時候的細胞狀態是的。對于HEK293T來說，一般轉染的時間是在傳代后24hr以內。轉染后48hr，外源基因肯定是有表達的。至于72hr，應該也還是有表達的，可能表達量會很低，主要是這個時間點的細胞大部分都衰老了。建議293T收集細胞，在轉染后36-48hr收集。

時間進度

一般原則提示：要確保zui終結果的成功；建立一個合適的時間進度進行轉染實驗以保證您所需要的目的蛋白能得到表達。

轉染的開始——在轉染前12小時，將細胞分種于培養板中。在細胞達到50-80%的融合率時開始轉染，這樣就可以使它們在實驗結束時達到接近的融合。細胞對轉染復合物的攝取通常在0.5-6小時的時間內完成。在這段時間后，就不會再發現轉染效率有所增長。

培養基更換——某些轉染試劑在攝取階段之后需要更換培養基。如果轉染必須在沒有胎牛血清存在的條件下進行，那么這一步驟就*。而對于可在血清存在的情況下使用的無毒性轉染試劑時，如果有足夠的培養基用于后續表達階段，就可以省略這一步。

如果將轉染復合物留在培養基中直到進行檢測，那么對有些細胞系而言轉染效率會有所提高，而另外一些細胞在轉染開始幾個小時之后其轉染效率就不會再有升高。雖然在轉染步驟之后轉染劑/DNA復合物通常不一定要從培養體系中清除，但在此后的*生長階段換用新鮮的培養基卻是必須的。如果轉染細胞需要生長3-7天，換培養基就尤其重要，這樣一來就使它們有時間達到zui高的蛋白表達量。

時間測定——轉染開始后的24-48小時內，干細胞報告基因產物的濃度逐漸增加；而這種增加取決于增強子的強度、表達外源蛋白中所涉及的細胞反應，存活細胞的健康狀態，以及營養因素等。在轉染后等待3-7天收集蛋白進行純化較為常見了。

zui后就是平時可能會忽略的轉染試劑本身的脫靶效應off-target effect，轉染試劑本身對基因表達水平（高表達或低表達）的影響，有時候可能會造成假陽性的結果。
供HPLC法系統適用性    50mg    *雜質Ⅰ    常溫，避光    *：    規格:
供鑒別用    100mg    *    常溫，避光    *：    規格:
供檢查用    50mg    反式*    常溫，避光    *：    規格:
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