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盡管新腫瘤細胞的轉染試劑在不斷涌現,一代更比一代強,但面對原代細胞,它們的效果仍然不盡如人意。于是,日本名古屋大學的研究人員做了一個大膽的嘗試,將兩種的轉染試劑結合使用,竟然取得了不錯的效果。下面,我們就來看看他們是怎么做的。
目前,脂質體轉染試劑被廣泛使用,因為它們使用簡便,也不需要特殊設備。不過,這些試劑在原代細胞上的轉染效果不佳。為了解決這個問題,研究人員決定組合使用Lipofectamine LTX和FuGENE HD這兩種試劑,來轉染原代成纖維細胞和成肝細胞。
研究人員從小鼠胚胎中分別獲取了原代成纖維細胞和成肝細胞。他們將pRL-CMV質粒轉染到細胞內,以檢驗轉染效率。pRL-CMV來自Promega公司,它在CMV啟動子的控制下組成型表達海腎熒光素酶。因此,利用雙熒光素酶報告基因檢測系統可以確定轉染效率。
當然,轉染效率的提高也不能以細胞死亡為代價。于是,研究人員又利用Promega的CellTiter-Glo細胞活力檢測系統來評估細胞活力。他們通過光度計測量儀來測定相對光強度(RLU),以反映熒光素酶活性或細胞活力。
研究結果表明,Lipofectamine LTX和FuGENE HD的結合使用提高了原代成纖維細胞的轉染效率。另外,Lipofectamine LTX在購買時還附帶了一種Plus試劑。根據說明,在轉染過程中添加Plus試劑可提高轉染效率。研究人員也嘗試著添加Plus試劑,發現轉染效率的確有上調。
之后,研究人員又將這種組合應用在原代成肝細胞上。他們發現,盡管轉染效率有所提高,但是不如原代成纖維細胞那么顯著。此外,與單用FuGENE HD相比,試劑組合的使用降低了細胞活力。為此,他們優化了實驗,提高了細胞密度,使得結果改善。
作者指出,腫瘤細胞脂質體介導的基因轉移取決于多個因素,如脂質體/DNA復合物的凈電荷和結構。他們推測,Lipofectamine LTX和FuGENE HD的組合也許優化了復合物的形成,故提高了原代細胞的轉染效率。不過。這些試劑的化學結構并未公布,因此機制仍無法獲知。
20mg/支 Compound K 人參皂苷CK HPLC≥98%
20mg/支 (−)-Gallocatechin gallate;GC 沒食子兒茶素 HPLC≥98%
20mg/支 (−)-Catechin gallate;CG 兒茶素沒食子酸酯 HPLC≥98%
0001-9503 對照品 醋酸* 含量測定 50mg
100002-199504 對照品 * 檢查 500mg
100004-198102 對照品 * 含量測定 50mg
0005-9402 對照品 苯丁酸氮芥 含量測定 50mg
100006-200504 對照品 苯甲酸雌二醇 含量測定 100mg
100008-199404 對照品 * 含量測定 50mg
100010-200507 對照品 * 含量測定 50mg
腫瘤細胞
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