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上海莼試生物技術有限公司
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人源細胞適應無血清培養基的方法

時間:2018-3-23閱讀:119
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目前,血清仍是人源細胞培養中zui基本的的添加物,尤其是在原代培養或者細胞生長狀況不良時,常常會先使用有血清的培養液進行培養,待細胞生長旺盛以后,再換成無血清培養液。細胞轉入無血清培養基培養要有一個適應過程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無血清培養。在降低過程中要注意觀察細胞形態是否發生變化,是否有部分細胞死亡,存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。
為了使細胞適應無血清培養,關鍵的是將所培養細胞:
1.處于對數生長中期
2.>90% 活細胞率
3.適應時以較高的起始細胞接種
以下是細胞適應無血清培養基的使用方法:
*、直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中。一些類型細胞可直接從包含血清的培養基適應無血清培養基。
第二、連續適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中,與直接適應相比較,連續適應趨向對于細胞更加溫和一些。
(1)以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養物到75%有血清培養基:25%SFM 混合培養基中,傳代培養。
(2)當細胞密度>5×105細胞/ml時,以2×105到3×105細胞/ml細胞密度,在有血清培養基:SFM為50∶50的混合培養基中傳代培養。
(3)以2×106到3×106細胞/ml細胞密度,25%有血清培養基和75% SFM中傳代培養。 (4)當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培養基中傳代培養。
(5)每隔3到5天,當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。
在實驗后這些人源細胞一般不再繼續保留,很少有細胞能夠*培養于無血清培養基而不發生改變的。細胞轉入無血清培養之前,要留有種子細胞,種子細胞按常規培養于含血清的培養基中,以保證細胞的特性不發生變化。
200mg    Isradipine     75695-93-1     依拉地平標準品
200mg    Isoxsuprine Hydrochloride     579-56-6     異舒普林鹽酸鹽標準品
200mg    Isotretinoin     4759-48-2     *標準品
200mg    Isopropamide Iodide    71-81-8     異丙碘胺標準品
200mg    Isoniazid     54-85-3     雷米封標準品
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人源細胞

 

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