我公司提供的吲哚乙酸氧化酶活性檢測試劑盒100管/96樣規格方法分類：紫外分光光度法、可見分光光度法、微量法、酶法、高效液相色譜法本方法提供代測服務!咨詢！
產品名稱：吲哚乙酸氧化酶活性檢測試劑盒100管/96樣規格
規格：100管/96樣
測試方法：微量法
測定意義：
吲哚乙酸（IAA）在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破壞失去活性。植物體內吲哚乙酸氧化酶活力的大小，對調節體內吲哚乙酸的水平，起著重要的作用，而影響植物的生長。
測定原理：
在無機酸存在情況下，吲哚乙酸能與FeCl3作用，生成紅色螯合物，該物質在530nm處有Z大吸收峰，酶活力的大小可以其破壞吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法測定。
自備儀器和用品：
低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、可見分光光度計/酶標儀、1.5mL離心管、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。
吲哚乙酸氧化酶活性檢測試劑盒100管/96樣規格成及試劑配制
1：預包被板: 96T/48T
2：酶標記抗體: (30倍濃縮)HRPIgG,親合純化 0.4mL x 1
3：標準品: -6 0.5mL x 2
4：EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1
5：標記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1
6：顯色劑: TMB底物液 15mL x 1
7：終止液: 1N 12mL x 1
8：濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1
操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 分組：取出 96 孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準 品組（6 個濃度）、空白孔、待測樣品組。 注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。
3. 加樣：依照標準品的順序分別加入 50ul 的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水；其余微孔中加入 50ul 的待測樣本。
4. 加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入 100ul 的酶標溶液（空白對照孔除外）。
5. 溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內于 37℃恒溫孵育 1 小時。
6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置 15-30s，充分清洗酶標板 5 次，用吸水紙*拍干。 7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul。
8. 終止：25-37℃下避光反應 10-15 分鐘，加入 50ul 終止液。

吲哚乙酸氧化酶活性檢測試劑盒100管/96樣規格注意事項：
1. 實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免*孔與Z后一孔間的時間間隔過大，否則將會導致不同的預孵育時間，從而影響 實驗的準確性以及重復性。
3. 孵育：嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行。
4. 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化，如果顏色較深，請提前加入終止液終止反應。
5. 建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結果時乘以相應的稀釋倍數。
6. 建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線，試用幾個標本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經銷商， 如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調換，但概不承擔產品本身以外的任何損失。

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吲哚乙酸氧化酶活性檢測試劑盒100管/96樣規格phospho-ATF1 (Ser63) 磷酸化活化轉錄因子1抗體
phospho-ATF2 (Ser480) 磷酸化活化復制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr51 + Thr53) 磷酸化活化復制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr69 + Thr51) 磷酸化活化復制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr73 + Thr55) 磷酸化活化復制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr71 + Thr53) 磷酸化活化復制因子2抗體
phospho-ATF2(Thr71) 磷酸化活化復制因子2抗體

9. 讀板：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。 注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應后的 30 分鐘內，以免影響準確性。
數據計算
1. 繪制標準曲線：各標準品 OD 值減去底色即減去空白孔 OD 值，以 6 個標準 品的 OD 值為縱坐標 y，以標準品的濃度為橫坐標 x，繪制曲線圖，如圖示， 并計算出回歸方程 y=ax+b。
2. 將待測樣品的 OD 值代入方程式，計算各組樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即 為樣品的實際 ABP 濃度。
3. 敏感度：1.0 pg/ml