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線粒體在細胞凋亡檢測的過程中起著樞紐作用,細胞凋亡刺激因子均可誘導不同的細胞發生凋亡,而線粒體跨膜電位的下降,被認是細胞凋亡級聯反應過程中早發生的事件,它發生在細胞核凋亡特征(染色質濃縮、DNA斷裂)出現之,旦線粒體DYmt崩潰,則細胞凋亡不可逆轉線粒體跨膜電位的存在,使一些親脂性陽離子熒光染料如Rhodamine 123、3,3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1]、Tetramethyl rhodamine methyl ester(TMRM)等可結合到線粒體基質,其熒光的增強或減弱說明線粒體內膜電負性的增高或降低。
方法:將正常培養的細胞和誘導凋亡的細胞加入使用終濃度為Rhodamine 123(1mM)或終濃度為DiOC6(25nM),JC-1(1mM),TMRM(100nM),37°C平衡30min,流式細胞計檢測細胞的熒光強度。
注意事項:
1. 細胞凋亡檢測始終保持平衡染液中pH值的一致性,因為pH值的變化將影響膜電位。
2. 與染料達到平衡的細胞懸液中如果含有蛋白,他們將與部分染料結合,降低染料的濃度,引起假去極化。
艾滋病病毒IgG 小鼠巨噬炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)
氨基末端激酶2IgG 小鼠巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)
氨基末端激酶3IgG 小鼠巨噬集落刺激因子(M-CSF)
氨肽酶NIgG 小鼠解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)
按蚊IgG 小鼠解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)
白介素10IgG 小鼠解脲脲原體(UU-Ab)
白介素11IgG 小鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)
白介素12IgG 小鼠角化內分泌因子(KAF)/雙調蛋白(AR)
白介素13IgG 小鼠角化內分泌因子(KAF)/雙調蛋白(AR)
細胞凋亡檢測
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