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Caspase 8 活性檢測試劑盒100T實驗方法儲存條件：裂解緩沖液和檢測液室溫保存；其他-20℃避光保存。

有效期：一年。

產品簡介：

Caspase8活性檢測試劑盒(Caspase8ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中Caspase8酶活性或純化的Caspase8酶活性的試劑盒。Caspase(Cysteine-requiringAspartateProtease)是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase8被認為是細胞凋亡信號轉導過程中比較上游的一個caspase。在Fas-receptor和TNFR-1介導的細胞凋亡過程中caspase8被激活，形成一個由p18和p10組成的二聚體，進一步激活下游的caspase4，caspase6，caspase9和caspase10.本Caspase8活性檢測試劑盒是基于casepase8可以催化底物Ac-IETD-pNA產生黃色的pNA，pNA在405nm附近有強吸收，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase3的活性。本試劑盒用酶標儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測，可用于培養細胞或新鮮組織樣本的caspase-8檢測。

Caspase 8 活性檢測試劑盒100T實驗方法實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細胞懸液每50～100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養液中，稀釋至10uM ，處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光；而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞：
（1）取 10～60 萬細胞，重懸于 0.5mL 細胞培養液中，細胞培養液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
Caspase 8 活性檢測試劑盒100T實驗方法注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質，在操作時請注意避光。在處理和標記時，盡可能在暗處進行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后，在暗室內用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作，以免影響細胞狀態。
（5）在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內進行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
Isol from coml. Japanese rhubarbs (Rheum spp.) Resveratrol 4'- (6-galloylglucoside) 64898-03-9 C27H26O12 ≥98%

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N-甲基野靛減;N-*金雀花減 N-metxylcytisine 6-86-2 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

HPLC法含量測定*100627-200401常溫，避光100mg

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3-巰基-2-甲丙酸1.2-二本乙胺鹽標準品

夏雪銀線蕨Pteris cretica 2,6,16-Kauranetriol 2-O-β-D-allopyranoside 2-O-beta-D-阿洛糖甙-2,6,16-貝殼杉烷三醇 195735-16-1 C26H44O8 ≥95%
溴化四乙，英文名或英文縮寫：TMD-10，級別：AR，99.8%，規格：500毫升

(芐*鈉鹽)

1,3-DipxenylureaN,N'-二本基脲25克SP

無水錄化鈷 Cobclt chloridq 7646-79-9

Phosphoglucomutase嶙酸葡萄糖變位酶25克BR，1500u/mg
3-扶shēng huà shì jì容量：RT，避光100克

532-02-52-磺酸鈉;β-磺酸鈉2-sulfonic acid wo7ium salt;β-sulfonic acid wo7ium salt

酪蛋白基酸(酸解)shēng huà shì jì容量：RT25克

苯乙酰 Phenyl acetyl chloride,≥98.0% 103-80-0 25G 通用試劑

芒果苷 Mangiferin (≥98%,HPLC) 4773-96-0 20MG 標準品
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