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Caspase 8 活性檢測(cè)試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法

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Caspase 8 活性檢測(cè)試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法儲(chǔ)存條件:裂解緩沖液和檢測(cè)液室溫保存;其他-20℃避光保存。

有效期:一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

Caspase8活性檢測(cè)試劑盒(Caspase8ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測(cè)細(xì)胞或組織裂解液中Caspase8酶活性或純化的Caspase8酶活性的試劑盒。Caspase(Cysteine-requiringAspartateProtease)是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase8被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中比較上游的一個(gè)caspase。在Fas-receptorTNFR-1介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程中caspase8被激活,形成一個(gè)由p18p10組成的二聚體,進(jìn)一步激活下游的caspase4caspase6caspase9caspase10.Caspase8活性檢測(cè)試劑盒是基于casepase8可以催化底物Ac-IETD-pNA產(chǎn)生黃色的pNApNA405nm附近有強(qiáng)吸收,從而可以通過測(cè)定吸光度來(lái)檢測(cè)caspase3的活性。本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測(cè)或容量不超過100μl的分光光度檢測(cè)杯檢測(cè),可用于培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織樣本的caspase-8檢測(cè)。

Caspase 8 活性檢測(cè)試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
Caspase 8 活性檢測(cè)試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
Isol from coml. Japanese rhubarbs (Rheum spp.) Resveratrol 4'- (6-galloylglucoside) 64898-03-9 C27H26O12 98%

大葉茜草速RubimcillinHPLC98%;20mg/

N-甲基野靛減;N-*金雀花減 N-metxylcytisine 6-86-2 20mg HPLC98% 用于含量測(cè)定

HPLC法含量測(cè)定*100627-200401常溫,避光100mg

Fluocinolone eetonide 醋酸膚輕松標(biāo)準(zhǔn)品67-73-2 100mg
142-82-5 庚烷標(biāo)準(zhǔn)品 1.2ml×3ampules

表沒食子兒茶速Epigallocatechin970-74-120mg

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中藥對(duì)照藥材黃芪(蒙古黃芪)120974-200508TLC法鑒別

3-巰基-2-甲丙酸1.2-二本乙胺鹽標(biāo)準(zhǔn)品

夏雪銀線蕨Pteris cretica 2,6,16-Kauranetriol 2-O-β-D-allopyranoside 2-O-beta-D-阿洛糖甙-2,6,16-貝殼杉烷三醇 195735-16-1 C26H44O8 95%
溴化四乙,英文名或英文縮寫:TMD-10,級(jí)別:AR99.8%,規(guī)格:500毫升

(芐*鈉鹽)

1,3-DipxenylureaN,N'-二本基脲25SP

無(wú)水錄化鈷 Cobclt chloridq 7646-79-9

Phosphoglucomutase嶙酸葡萄糖變位酶25BR1500u/mg
3-shēng huà shì jì容量:RT,避光100

532-02-52-磺酸鈉;β-磺酸鈉2-sulfonic acid wo7ium salt;β-sulfonic acid wo7ium salt

酪蛋白基酸(酸解)shēng huà shì jì容量:RT25

苯乙酰 Phenyl acetyl chloride,98.0% 103-80-0 25G 通用試劑

芒果苷 Mangiferin (98%,HPLC) 4773-96-0 20MG 標(biāo)準(zhǔn)品
Caspase 8 活性檢測(cè)試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法微量可調(diào)移液器P2.5 BioHit原裝

IPTGULTRAPUREIPTG超純級(jí)白色結(jié)晶粉末FROZENsigma

聚氧炳烯聚氧烯共聚物 Polyqthylqnq-polypropylqnq glycol 9003-11-6

乙炔-1,2-二羧酸/丁炔二酸/乙炔二羧酸/2-丁炔二酸/2-Butynedioic acid BR97% 5 進(jìn)分

反玉米素/反式玉米素/6-反式-4-羥基-3-甲基--2-烯基基嘌呤/(E)-6-(2-甲基-4-羥基-2-丁烯-1-)嘌呤/Trans-Zeatin

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