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DHR-ROS活性氧檢測(cè)試劑盒200T實(shí)驗(yàn)方法儲(chǔ)存條件：-20℃保存。

有效期：六個(gè)月。

產(chǎn)品簡介：

活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等，參與細(xì)胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多和病理過程。

DHR活性氧檢測(cè)試劑盒是一種利用熒光探針DHR進(jìn)行活性氧檢測(cè)的試劑盒。用488nm激發(fā)，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測(cè)DCF 熒光，從而測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。

DHR-ROS活性氧檢測(cè)試劑盒200T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對(duì)于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
DHR-ROS活性氧檢測(cè)試劑盒200T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測(cè)；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對(duì)眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請(qǐng)盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
（7）PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill. Schisandrin A 五味子甲素 61281-38-7 C24H32O6 ≥98%

貝母速PqimininqHPLC≥98%，20mg/支

蟾毒靈;蟾酥靈 Bufalin 465-21-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

UV含量測(cè)定托芬那酸100690-200401常溫，避光100mg

Poloxamer Solid 泊洛沙姆固體標(biāo)準(zhǔn)品9003-11-61g
1693-37-4 N-乙酰對(duì)安基酚相關(guān)雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品(NA) 30mg

黃皮Clausena lansium 雙丙同安草酸鹽 625-04-7 C6H13NO ≥95% CORYNANTHINE(RAUHIMBINE(RG0 812-025

對(duì)照品*100071-199905含量測(cè)定

Estradiol Cypionate環(huán)戊丙酸雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品313-06-4200mg環(huán)戊丙酸雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品

紫莖澤蘭Eupatorium adenophorum 3-Acetoxy-4,7(11)-cadinadien
姜黃 Curcuma longa L. Tetraxy7nocucumin 四氫姜黃素 36062-04-1 C21H24O6 ≥98%

柚皮速-7-O-葡萄糖醛醋苷Ncringqnin-7-O-glucuronidq20mg

馬兜鈴酸B;馬兜鈴酸II Aristolochic Acid B 313-67-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

對(duì)照品N-氧化*130522-200301系統(tǒng)適應(yīng)性

靈芝酸D Ganoderic acid D 108340-60-9 20mg HPLC≥98% 本品用于含量測(cè)定
細(xì)胞活性鑒別染液20片/箱

1313-13-9二氧化錳;氧化錳(Ⅳ);過氧化錳Manganese(IV) oxide;Manganese binoxide

無水錄化鉻(III)5克2～8℃

安塞蜜 Acesulfame K,≥99.0% 55589-62-3 25G 通用試劑

5-噻吩-2-磺酰胺 5-Chloro-2-thiophenesulfonamide,97% 53595-66-7 1G 通用試劑
4-甲基傘形酮，英文名或英文縮寫：4-MU，級(jí)別：試劑級(jí)，92%，規(guī)格：100克

513-78-0碳酸鎘CadMiuM te

L-谷酸γ-甲酯，英文名或英文縮寫：L-Glutamic acid 5-metxyl ester，級(jí)別：BR，98%，規(guī)格：1克

苯并呋喃 2,3-Benzofuran,99% 271-89-6 5G 通用試劑

基丁三醇 (細(xì)胞級(jí)) Trizma base (cell culture tested, ≥99... 77-86-1 100G 緩沖液
DHR-ROS活性氧檢測(cè)試劑盒200T實(shí)驗(yàn)方法肽酶抑制劑鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：Amastatin xy7nochloride hydrate，級(jí)別：生物技術(shù)級(jí)，99%，規(guī)格：25毫克

1676-73-9L-谷酸-γ-芐酯 (+4`C)gamma-Benzyl L-glutamate

BOC-L-白酸，英文名或英文縮寫：BOC-L-Leucine，級(jí)別：BR，99%，規(guī)格：10克

一溴化 monobromide,≥98.0% 7789-33-5 25G 通用試劑

瓊脂糖凝膠 Sepharo... Sepharose 2B 9050-94-6 250