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細胞核蛋白提取試劑盒100T實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數量不以應低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
產品名稱:細胞核蛋白提取試劑盒100T實驗方法
產品簡介:
核蛋白提取試劑盒提供全套試劑,適用于從各種原代或傳代細胞中提取核蛋白。提取過程簡單方便,可在1小時內完成。制備的核蛋白不僅純度高,保持天然活性,而且絕少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。
細胞核蛋白提取試劑盒100T實驗方法操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內,進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養細胞并誘導細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡,并設立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發波長546nm,發射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發波長Ex=546 nm; 發射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
細胞核蛋白提取試劑盒100T實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
白屈菜 Chelidonium majus L. Sanguinarine 血根堿 2447-54-3 C20H14NO4+ ≥98%
高三尖杉酯減HomohcrringtoninqHPLC≥98%,20mg/支
茶減 Theophylline 58-55-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
HPLC法含量測定鹽酸布替奈芬100681-200501常溫,避光100mg
Ibuprofen *標準品15687-27-1 750mg
160337-95-1 *標準品(NA) 15mg
高麗槐速;馬卡因GaoLihuai;maackiain19908-48-6HPLC≥98%,20mg/支
LaMiide LAMIIDE 27856-54-8
噻嘧啶相關物質A標準品25mg噻嘧啶相關物質A標準品
5,6-二甲基呫噸酮-4-乙酸 117570-53-3 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
黃連堿 Coptisine (≥98%,HPLC) 3486-66-6 20MG 標準品
余甘子Phyllanthus emblica 算盤子二醇 6610-56-6 C30H50O2 ≥97.5% 胡黃連苦甙 I168195
Sesamin芝麻素607-80-720mg/支
Oxymetxolone CIII羥甲稀龍標準品434-07-1 200mg
長春花 Catharanthus roseus (L.)G.Don Catharanthine 長春質堿 2468-21-5 C21H24N2O2 ≥98%
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