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RIPA裂解液(蛋白裂解液)50ml免費代測使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數量不以應低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
產品名稱:RIPA裂解液(蛋白裂解液)50ml免費代測
儲存條件:裂解液室溫保存;抑制劑-20℃保存。
有效期:一年。
產品簡介:
RIPA裂解液采用優質原料配制,對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用,是經典常用的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等下游實驗。RIPA裂解液中已含常用磷酸酶抑制劑。
RIPA裂解液(蛋白裂解液)50ml免費代測操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內,進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養細胞并誘導細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡,并設立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發波長546nm,發射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發波長Ex=546 nm; 發射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
RIPA裂解液(蛋白裂解液)50ml免費代測實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
半枝蓮 Portulaca grandiflora Hook Scutebarbatine A 半枝蓮堿 176520-13-1 C32H34N2O7 ≥98%
擬人參皂苷RT5PsquoginsqnosidqRT5HPLC≥98%;20mg/支
新*內酯;*丙素,新*素,*新苷 Neoandrographolide 5508-58-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
含量測定*100704-200501常溫,避光100mg
Testosterone Propionate
17-羥基 sprengerin... xy7noxy Sprengerinin C, 17 (HPLC,≥98%) 1029017-75-1 10MG 標準品
腺花香茶菜Isodon adenantha 十輕-7,7,9a-*基-4-亞甲基-6H-環氧并[5,6]環壬烷并[1,2-b]呋喃-6-同 102227-61-2 C15H22O3 ≥98% 迷迭香酸18 705
對照品典化鉀100194-200502含量測定
Testolactone CIII睪內酯酮標準品968-93-4 125mg睪內酯酮
219921-94-5 *相關物質A標準品 25mg
蛹蟲草 Cordycepsmilitaris 蟲草素 73-03-0 C10H13N5O3 ≥98% 言酸甲扶喹(M025 000
百草枯二錄鹽(P 百科(聯本三坐醇 百菌清標準品
西酞普蘭相關物質F標準品55011-89-7200mg
補骨脂酚 10309-37-2 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
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