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高爾基體提取試劑盒100T實驗方法儲存條件:2-8℃保存。
有效期:一年。
產品簡介:
高爾基體(Golgiapparatus,Golgibodies)是由許多扁平的囊泡構成的以分泌為主要功能的細胞器。又稱高爾基器或高爾基復合體;高爾基體是由數個扁平囊泡堆在一起形成的高度有極性的細胞器。常分布于內質網與細胞膜之間,呈弓形或半球形,凸出的一面對著內質網稱為形成面(formingface)或順面(cisface)。凹進的一面對著質膜稱為成熟面(matureface)或反面(transface)。
高爾基體提取試劑盒100T實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養液中,細胞培養液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
高爾基體提取試劑盒100T實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
大葉藤黃Garcinia xanthochymus 1,4,6-Trixy7noxy-5-metxoxy-7-prenylxanthone 1,4,6-三羥基-5-甲氧基-7-異戊二烯基呫噸酮 160623-47-2 C19H18O6 ≥95%
丹參速內wo7iumDcnshqnsuHPLC≥98%,20mg/支
黃華減 Thermopsine 486-90-8 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
標準試劑庚烷磺酸鈉/
Soyasapogenol A大豆甾醇A純度:>98%
22630-25-7 錄本那敏相關物質B標準品USP雜質對照品(N/A) 10mg
Kopsia yunnanensis none 888482-17-5 C23H26N2O6 ≥97% 葡甲安 - 對照譜圖(Y0000267
Tranexamic Acid 安甲環酸標準品1197-18-8 200mg
萬乃洛韋相關物質F標準品86150-61-0 25mg
酸棗仁皂苷A 55466-04-1 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
非洲馬鈴果Voacanga africana Tubotaiwine none 6711-69-9 C20H24N2O2 ≥95%
異綠原醋AcISOchlorogqnicccid420-23-220mg
西伯利亞遠志糖A5 Sibiricose A5 107912-97-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
標準品*140604-200623供*效價測定用
10-脫乙酰基巴卡丁III Deacetylbaccatin III 32981-86-5 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
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