大腸桿菌膜蛋白提取試劑盒50T實驗方法儲存條件： 蛋白酶抑制劑-20℃保存； 蛋白提取液2-8℃保存。

有效期：一年。

產品簡介：

膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質譜分析等應用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰。傳統制備膜蛋白樣品的方法是使用去污劑和表面活性劑增溶。去污劑處理會使膜蛋白喪失其天然結構，因而妨礙了膜蛋白的功能研究。大腸桿菌膜蛋白提取試劑盒是一種基于化學方法的高產膜蛋白提取試劑盒。

 大腸桿菌膜蛋白提取試劑盒可以從各種大腸桿菌菌體中提取膜蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。

大腸桿菌膜蛋白提取試劑盒50T實驗方法實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細胞懸液每50～100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養液中，稀釋至10uM ，處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光；而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞：
（1）取 10～60 萬細胞，重懸于 0.5mL 細胞培養液中，細胞培養液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
大腸桿菌膜蛋白提取試劑盒50T實驗方法注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質，在操作時請注意避光。在處理和標記時，盡可能在暗處進行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后，在暗室內用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作，以免影響細胞狀態。
（5）在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內進行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
香櫞Citrus medica 2',4',6'-Trimetxoxyacetopxenone 2,4,6-*氧基本以酮 832-58-6 C11H14O4 ≥95%

大皇醋Rhqin20mg/支

甲基* metxyl hesperidin 11013-97-1 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

含量測定*100828-200501常溫，避光100mg

燈盞花乙素甲酯 Scularin metxylester 119262-68-9 20mg HPLC≥98% 燈盞花乙素甲酯 1
2387-23-7 *相關化合物C標準品(NA) 25mg

分葉小檗Berberis pruinosa 3,4-二輕基肉桂酰安 1202-41-1 C9H9NO3 ≥95% 番瀉甙A191555

*相關物質B標準品15mg

Cephapirin wo7ium頭孢匹林鈉標準品24356-60-3500mg

羥基積雪草苷 34540-22-2 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
豆科(Legumin0sae) 植物合歡的干燥樹皮 (-)-Syringaresnol-4-O-beta-D-apiofuranosyl -(1→2)-beta-D-glucopyranoside (-)-丁香樹脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷 136997-64-3 C33H44O17 ≥98%

異葒草苷Isooriqntin20mg/支

貝母素乙;貝母乙素 Peiminine 18059-10-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

含量測定* 100660-200401常溫，避光100mg

長春瑞賓相關物質A標準品25mg
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