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更新時(shí)間:2017-07-05 10:47:27瀏覽次數(shù):174次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 儀表網(wǎng)核蛋白提取試劑盒(無(wú)去垢劑)100T使用說(shuō)明書
總蛋白提取試劑盒(無(wú)去垢劑)100T實(shí)驗(yàn)方法
產(chǎn)品名稱:植物質(zhì)膜蛋白提取試劑盒50T使用說(shuō)明書
儲(chǔ)存條件:蛋白酶抑制劑-20℃保存; 其它組分2-8℃保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能,扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套,因此膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)制備膜蛋白樣品的方法是使用去污劑和表面活性劑增溶。去污劑處理會(huì)使膜蛋白喪失其天然結(jié)構(gòu),因而妨礙了膜蛋白的功能研究。
植物質(zhì)膜蛋白提取試劑盒是一種基于化學(xué)而非去污劑方法的高產(chǎn)質(zhì)膜蛋白提取試劑盒。針對(duì)性的提取植物組織質(zhì)膜蛋白,有效的避免細(xì)胞內(nèi)其它細(xì)胞器膜和核膜的污染。
植物質(zhì)膜蛋白提取試劑盒50T使用說(shuō)明書使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測(cè)組織樣本。
植物質(zhì)膜蛋白提取試劑盒50T使用說(shuō)明書操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō),也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng),用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm,發(fā)射波長(zhǎng)647 nm,7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
植物質(zhì)膜蛋白提取試劑盒50T使用說(shuō)明書實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
割舌樹Walsura robusta 3,7,16-Trixy7noxystigmast-5-ene none 289056-24-2 C29H50O3 ≥95%
1-咖非酰奎寧醋1-ccffqoylinoneicccidHPLC≥98%;20mg/支
金石蠶苷 Poliumoside 94079-81-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
檢查用*磺酰化物(雜質(zhì)D-5-甲氧基-2-{[(4-甲氧基-2-基)-甲基]-磺酰基}-1H-本并咪唑100838-200601常溫,避光20mg
錄化
2447-57-6 周效磺胺標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
β-桉葉醇Betaeudesmol21317-08-9HPLC≥98%,20mg/支
Cajanin 2',4',5-三輕基-7-甲氧基異黃同 32884-36-9
Flumetxasone Pivalate 雙扶美松叔戊酸酯標(biāo)準(zhǔn)品2002-29-1 200mg雙扶美松叔戊酸酯標(biāo)準(zhǔn)品
丹皮酚原苷 72520-92-4 HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢
牛耳楓 Niu Erfeng 0.5g
異甘草甙Isoliquiritin2041-81-6HPLC≥98%,20mg/vial
多根烏頭減 Karacoline 39089-30-0 >98% 20mg/支
蘆薈瀉素蘆薈大黃素481-72-1Aloeemodin
羥基積雪草酸 Madecassic acid 18449-41-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
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人布病抗體(Brucellosis-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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