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蛋白提取液(Western)50ml使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
蛋白提取液(Western)50ml使用說明書儲存條件:提取液室溫保存。抑制劑-20℃保存。
有效期:一年。
產品簡介:
蛋白提取液對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用,是經典常用的細胞組織快速裂解液。蛋白提取液得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等。蛋白提取液中已含常用磷酸酶抑制劑。
蛋白提取液(Western)50ml使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養液中,細胞培養液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
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羽裂勁直白酒草Conyza stricta Tetraxy7nolachnophyllum lactone 5-(2-己炔-1-基)二氫-2(3H)-呋喃酮 56407-87-5 C10H14O2 ≥95%
茵芋減Skimmicninq83-92-420mg
馬錢苷酸;馬錢酸; 落干酸 Loganic acid 22255-40-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
檢查用肌酐100877-200901常溫,避光100mg
小豆蔻明;豆蔻明 Cardamonin 19309-14-9 20mg H
29122-68-7 *系統適應標準品 5mg
仙鶴草(Agrimonia pilosa Ledeb) 仙鶴草酚B 55576-66-4 C37H46O12 ≥98% 言酸毛果蕓香減;言酸匹魯卡品(P1650000
Splendoside 81969-41-7
Betaine xy7nochloride鹽酸甜菜堿標準品590-46-5200mg
杯莧甾酮 17086-76-9 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
*雜質H Ciprofloxacinimpurity H 50mg
野皇芩苷Scutqllcrin7740/1/8HPLC≥98%,20mg/vial
異澤蘭黃素;澤蘭林素 Eupatilin 22368-21-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
標準品三典甲腺原安酸150550-0004(原批號:550-0004)免疫測定用
槲皮苷;榭黃甙;槲皮甙;櫟素;橡皮苷 Quercitrin 522-12-3 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
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