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活細胞/膜損傷細胞雙染試劑盒500T免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養液中,細胞培養液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
活細胞/膜損傷細胞雙染試劑盒500T免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
C2C12(小鼠成肌細胞) 5×106cells/瓶×2
T-107A*(含10mL酶解緩沖液)1mL
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)
HEp-2細胞,人喉表皮樣癌細胞 人臍靜脈內皮細胞,HUVE-12/CRL2480細胞 敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21
大鼠胰島β細胞瘤細胞;RIN-m5F
CNTN1 Others Human 人 CNTN1 / Contactin-1 人細胞裂解液 (陽性對照)
SGC-7901, 人胃腺癌細胞系
IL18R1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IL18R1 人細胞裂解液 (陽性對照)
人肺轉化細胞;AE1201
猞猁皮膚成纖維樣細胞;ELS1 大鼠腎細胞,NRK細胞 NBTF細胞,新生牛眼Tenon's囊成纖維細胞
人羊膜細胞;WISH
HA Others H12N5 甲型流感 H12N5 (A/green-winged teal/ALB/199/1991) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)
IFNA1 Others Rat 大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 人細胞裂解液 (陽性對照)
氣管上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
大鼠尿道上皮細胞*培養基 100mL
SHZ-88大鼠癌細胞 Breast cancer cells of SHZ-88 rats DMEM培養基+10%FBS
IGFBP4 Protein Mouse 重組小鼠 IGFBP4 蛋白 (His 標簽)
Hep B1.2(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 痢疾志賀氏菌
大鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒 ,英文名: GIP ELISA Kit
人血清素/血清胺(ST)ELISA檢測試劑盒HumanSerotonin,SISAKit 96T/48T
魚葡萄糖-6-磷酸酶(G6PC)免疫試劑盒 Fish glucose-6-phosphatase,G6PC ELISA kit
CLIAKitforPF/PFP(HumanPerforin/Pore-formingprotein)ELISAKit人穿孔素/成孔蛋白規格:48T/96T
食物維生素A高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitE3人雌三醇規格:48T/96T
小鼠骨堿性磷酸酶(BALP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human growth hormone releasing peptide (GHRP) ELISA Kit 人生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒
Humangastricinhibitorypolypeptide,GIPELISAKit 人胃抑素(GIP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humananti-ribonucleoproteinAntibody,RNP-AbELISA試劑盒人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)ELISA試劑盒規格:96T/48T
植物細胞原生質體化學轉染試劑盒10次
HumanTumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISAKit人壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒規格:96T/48T
活細胞/膜損傷細胞雙染試劑盒500T免費代測小鼠α半乳糖基抗體(Gal)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠αN已酰基葡糖苷酶(αNAG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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