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conn改良Weigert*4X50ml實(shí)驗(yàn)方法

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更新時(shí)間:2017-07-06 09:21:02瀏覽次數(shù):215次

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conn改良Weigert*4X50ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類(lèi)推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線(xiàn)粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線(xiàn)粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
conn改良Weigert*4X50ml實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
Hut-102(人皮膚T淋巴瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21

TNFRSF13C Others Rat 大鼠 BAFFR / TNFRSF13C 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

PC-2細(xì)胞,人胰腺癌細(xì)胞 人皮膚癌細(xì)胞系,HS-4細(xì)胞 小鼠黑色素瘤瘤株;B16

人食道上皮細(xì)胞總RNAHEEpiC tRNA

Promocell C-22020 Endothelial Cell GrowthMedium MV, 內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基MV(即用型) 500ml
膀胱平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

IFNG Others Rat 大鼠 IFNG / Interferon Gamma 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

大鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

Vero非洲綠猴腎細(xì)胞 Vero the African green monkey kidney cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS

IFNW1 Protein Human 重組人 IFN omega 1 / IFNW1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

L Wnt-3A(小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 HeLa [ Chang Liver ](張氏肝細(xì)胞)
人毛發(fā)基質(zhì)細(xì)胞(HHZMC)( 5×105 )

人低分化肺腺癌細(xì)胞;GLC-82 [GLC82]

CL-0463UM-UC-3(人膀胱移行細(xì)胞癌)5×106cells/瓶×2

人腎癌細(xì)胞;A498 大鼠心肌成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

raw264.7 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞

PLA2G1B Others Mouse 小鼠 Phospholipase-A2 / PLA2G1B 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
大鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人血管緊張素Ⅱ(2-7)免疫試劑盒 Human angiotensin II(2-7)ELISA Kit

人抗Smith抗體(Sm)ELISA試劑盒 ,英文名: Sm ELISA Kit

RatLaminin,LNELISA試劑盒大鼠層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

Humanglycosylatedserumprotein,GSPELISA試劑盒人糖化蛋白(GSP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

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小鼠催乳素(PRL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human carbonic anhydrase (CA) ELISA Kit 人碳酸酐酶(CA)ELISA試劑盒

HumanComplementfragment3a,C3aELISAKit 人補(bǔ)體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanbasicfibroblastgrowthfactor4,bFGF-4ELISA試劑盒人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4(bFGF-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

植物脂質(zhì)比色法定量檢測(cè)試劑盒20

HumanTestoteroneISAKit人睪同(T)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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人血管生長(zhǎng)因子(TAF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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人特異性抗原(TSA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

 

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