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葡萄糖-6-磷酸酶染色試劑盒(鉛法)3×50ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養液中,細胞培養液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
葡萄糖-6-磷酸酶染色試劑盒(鉛法)3×50ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
MDA-MB-453(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2
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FL62891細胞,人肝癌細胞 小鼠白血病克隆細胞系,L6565細胞 小耳豬肺細胞;SEP-L1
人脈絡叢上皮細胞裂解物HCPEpiCL
Promocell C-22162 Smooth Muscle Cell GrowthMedium 2 KIT, 平滑肌細胞生長培養基2型套裝 500ml
動物星形膠質細胞培養基AM-a
IFNA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 人細胞裂解液 (陽性對照)
人臍靜脈內皮細胞;HUV-EC-C
HNE2-LMP1細胞,人鼻咽癌細胞系 小鼠肝癌細胞,Hepa 1-6細胞 CM-H079人心臟微血管內皮細胞*培養基100mL
OVCAR-3(人卵巢癌細胞) 5×106cells/瓶×2
Promocell C-27410 Preadipocyte Growth Medium, 前脂肪細胞生長培養基(即用型) 500ml
PLA2G2E Others Mouse 小鼠 PLA2G2E 人細胞裂解液 (陽性對照)
人肺動脈平滑肌細胞總RNAHPASMC tRNA
U973 人白血病細胞
CL-0344HAN(人羊膜細胞)5×106cells/瓶×2
NSC,大鼠神經干細胞
人胚胎皮膚成纖維細胞;HES 人胎盤滋養層細胞*培養基 100mL
大鼠游離睪酮(F-TESTO)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人胸腺基質淋巴細胞生成素(TSLP)免疫試劑盒 Human TSLP ELISA Kit
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RatL-Phenylalanineammonla-lyase,PALELISA試劑盒大鼠L苯*解氨酶(PAL)ELISA試劑盒規格:96T/48T
Humangrowthhormone,HGHELISA試劑盒人生長激素(HGH)ELISA試劑盒規格:96T/48T
HumanLeptinReceptor,LEPRELISAKit人瘦素受體(LEPR)ELISA試劑盒規格:96T/48T
小鼠丙二醛(MDA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human specifie macrophage arming factor (SMAF) ELISA Kit 人特異性巨噬細胞武裝因子(SMAF)ELISA試劑盒
Humanmyosinlightchainkinase,MLCKELISAKit 人肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanBradykinin,BKELISA試劑盒人血管舒緩激肽(BK)ELISA試劑盒規格:96T/48T
植物組織可溶性總核蛋白粗提制備試劑盒20次
Humansreumalbumin,HSAELISAKit人血清白蛋白(HSA)ELISA試劑盒規格:96T/48T
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