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黏蛋白染色試劑盒(溫和甲基化法)2×50ml實驗方法

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更新時間:2017-07-06 09:36:21瀏覽次數:136次

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黏蛋白染色試劑盒(溫和甲基化法)2×50ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細胞培養液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
1)取 1060 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養液中,細胞培養液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
黏蛋白染色試劑盒(溫和甲基化法)2×50ml實驗方法注意事項
1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4下操作,以免影響細胞狀態。
5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
7PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
NAMALWA(Burkitt's淋巴瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY1022

SCN2B Others Human SCN2B 人細胞裂解液 (陽性對照)

CNE細胞,人鼻咽癌細胞 鼠骨髓瘤細胞,SP2/0-Ag14細胞 恒河猴皮膚細胞;RM-S1

黑色素細胞生長添加物(不含TPA)MelGS-2

Promocell C-24110 Melanocyte Growth Medium KIT, 黑色素細胞生長培養基套裝 500ml
CL-0402NCI-H520(人肺鱗癌細胞)5×106cells/瓶×2

IFNA1 Others Rat 大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 人細胞裂解液 (陽性對照)

小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞*培養基 100mL

U266人骨髓瘤細胞 U266 human myeloma cell 1640+15% FBS

IL33 Protein Canine 重組狗 IL33 / Interleukin-33 / NF-HEV 蛋白

NCI-H2227(人小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 KG-1(白血病細胞)
GSK3B Others Mouse 小鼠 GSK3B 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人肺微血管內皮細胞cDNAHPMEC cDNA

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A4

TE-11細胞,食管癌細胞 人食管癌細胞,CaEs-17細胞 大鼠胰腺外分泌腺細胞;AR42J

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B2

ICAM1 Others Human ICAM-1 / CD54 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠17-羥孕酮(17-OHP)ELISA試劑盒 ,英文名: 17-OHP ELISA Kit

人性激素結合球蛋白(SHBG)ELISA檢測試劑盒Humansexhormone-bindingglobulin,SHBGELISAKit 96T/48T

大鼠低密度脂蛋白*(LDL-C)免疫試劑盒 Rat Low Density Lipoprotein cholesterol,LDL-C ELISA kit

CLIAKitforTS(Humanthymidylatesynthetase)ELISAKit人胸苷酸合成酶規格:48T/96T

胚胎干細胞胰島細胞定向分化試劑盒5

H2A-H2B人抗組蛋白規格:48T/96T
小鼠白細胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat heat shock protein 27 (HSP-27) ELISA Kit 大鼠熱休克蛋白27(HSP-27)ELISA試劑盒

HumanCreatineKinase,CKELISAKit 人肌酸激酶(CK)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCA724ELISA試劑盒人標志物(CA724)ELISA試劑盒規格:96T/48T

質粒/蛋白制備樣品內毒素比色法定量檢測試劑盒20

Humansolubletransferrinreceptor,sTfRELISAKit人可溶性轉鐵蛋白受體(sTfR)ELISA試劑盒規格:96T/48T
黏蛋白染色試劑盒(溫和甲基化法)2×50ml實驗方法人血管緊張肽酶(Angiotensinase)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人血管緊張素轉化酶(ACE)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人血管緊張素Ⅱ轉化酶(ACE)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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