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苯胺藍染色液100ml免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養液中,細胞培養液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
苯胺藍染色液100ml免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
SGC7901(人胃癌細胞) 5×106cells/瓶×2
貓腎細胞;F81
DDR2 Others Cynomolgus 食蟹猴 DDR2 Kinase 人細胞裂解液 (陽性對照)
LTPEP-a-2細胞,人肺腺癌細胞 非洲綠猴腎細胞,VERO C1008 (E6)細胞 CM-M042小鼠直腸平滑肌細胞*培養基100mL
人脈絡叢內皮細胞HCPEC
NHEK-c adult 正常人表皮角質形成細胞(NHEK)成年單一捐獻者 500,000cells 原代骨細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml
CL-0462UMR-106(大鼠骨肉瘤細胞)5×106cells/瓶×2
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/2/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人髓核細胞RNAHNPC miRNA5 μg
兔角膜前基質層成纖維細胞;RCFBF 癌細胞,MCF7細胞 Cl.Ly1+2-/9細胞,小鼠T淋巴細胞
人臍靜脈內皮細胞;HUV-EC-C
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/goose/Guiyang/337/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)
GPNMB Others Human 人 GPNMB / HGFIN 人細胞裂解液 (陽性對照)
人骨骼肌成肌細胞cDNAHSkMM cDNA
3T3?L1 小鼠脂肪細胞
CL-0246YAC-1(小鼠淋巴瘤細胞)5×106cells/瓶×2
rCF, 大鼠心臟成纖維細胞
穩定表達EBNA1的人胚腎細胞;293E 人腎皮層上皮細胞*培養基 100mL
小鼠復制啟動因子1(REPIN1)ELISA試劑盒 ,英文名: REPIN1 ELISA Kit
人小扁結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體2(AFP-L2)ELISA檢測試劑盒Humanalpha-fetoproteinLensculinarisagglutiin2,AFP-L2ELISAKit 96T/48T
大鼠溶質載體家族2(易化葡萄糖轉運蛋白),成員2(SLC2A2)免疫試劑盒 Rat Solute carrier family 2,facilitated glucose transporter member 2,SLC2A2 ELISA kit
英文名稱RatEndothelialnitricoxidesynthase3ELISAKit大鼠內皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)規格:96T/48T
基因靶標技術試劑盒5次
ELISAKitCK-20人細胞角蛋白20規格:48T/96T
小鼠γ基丁酸(GABA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat renin (Renin) ELISA Kit 大鼠腎素(Renin)ELISA試劑盒
Humancalcineurin,CaNELISAKit 人鈣調磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanCCAAT/enhancerbindingproteindeta,C/EBPδELISA試劑盒人CCAAT增強子結合蛋白δ(C/EBPδ)ELISA試劑盒規格:96T/48T
轉基因玉米Bt176(maximizer)品系基因檢測試劑盒20次
Humansexhormone-bindingglobulin,SHBGELISAKit人性激素結合球蛋白(SHBG)ELISA試劑盒規格:96T/48T
苯胺藍染色液100ml免費代測人水通道蛋白5(AQP-5)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人水通道蛋白4(AQP-4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人水通道蛋白3(AQP-3)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人水通道蛋白2(AQP-2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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