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更新時間:2017-07-06 09:53:00瀏覽次數:578次
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甲苯胺藍水溶液(0.1%)100ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
甲苯胺藍水溶液(0.1%)100ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
SHG-44 (人膠質瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
豚鼠胚胎細胞;104C1
CD53 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD53 (aa 107-181) 人細胞裂解液 (陽性對照)
LTEP-a-2細胞,人肺腺癌細胞 猴腎細胞系,VERO E6細胞 CM-M050小鼠卵巢顆粒細胞*培養(yǎng)基100mL
子宮內膜上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
NHEK.f-c pooled 正常人表皮角質形成細胞(NHEK)少年,混合 500,000cells 原代上皮細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml
興國鯉尾鰭細胞;XGL
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)
CL-0270CRT(人神經膠質瘤細胞)5×106cells/瓶×2
KB-C1.5細胞,細胞 人T淋巴瘤轉基因細胞,Jurkat D,E細胞 人喉癌上皮細胞;Hep-2
769-P(人腎細胞腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
ACVRL1 Others Rat 大鼠 ALK-1 / ACVRL1 人細胞裂解液 (陽性對照)
CSNK1G2 Others Human 人 CSNK1G2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人骨骼肌成肌細胞HSkMM
長白山豬胚胎皮膚成纖維樣細胞;201184
BHK細胞,幼倉鼠腎細胞 人胰腺癌細胞,CFPAC-1細胞 CM-R093大鼠胎兒真皮成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠胰腺外分泌腺細胞;AR42J
RTN4R Others Human 人 RTN4R / NOGOR 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠*(FA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人小扁結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體1(AFP-L1)免疫試劑盒 Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 1,AFP-L1 ELISA Kit
γ-谷酰半胱酸連接酶(GCL)測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
RatMelatonin,MT/MLISA試劑盒大鼠褪黑素(MT/MLT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanheparincofactorⅡ,HCⅡELISA試劑盒人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanliverkidneymicrosomeautoantibody,LKMELISAKit人抗肝腎微粒體抗體(LKM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat kidney injury molecule 1 (Kim-1) ELISA Kit 大鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒
HumanCaldesmon,CALDELISAKit 人鈣調結合蛋白(CALD)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanCCAAT/enhancerbindingproteinepsilon,C/EBPεELISA試劑盒人CCAAT增強子結合蛋白ε(C/EBPε)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉基因玉米Bt-Xtra品系基因檢測試劑盒20次
humanserum/glucocorticoidregulatedkinase2,GSK2ISAKIT人血清/糖皮質激素調節(jié)激酶2(GSK2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
甲苯胺藍水溶液(0.1%)100ml實驗方法人水通道蛋白0(AQP-0)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人水帶狀皰疹病毒IgM(VZV-IgM)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人水帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人雙氫睪(DHT)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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