當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞氧化應激>> *100T實驗方法
*100T實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
*100T實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養液中,細胞培養液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
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G1(發綠色熒光的小鼠胚胎干細胞) 5×106cells/瓶×2
*/EDTA消化液T/E
OPALIN Others Human 人 OPALIN 人細胞裂解液 (陽性對照)
SK-OV-3細胞,人卵巢癌細胞 大鼠皮層神經元細胞,RN-c細胞 胃粘膜上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CL-0028AtT-20(小鼠垂體瘤細胞)5×106cells/瓶×2
HPlEpC Pellet 人胎盤上皮細胞團塊 > 1 mio.cells 人前脂肪細胞-內臟cDNAHPA-v cDNA
新生牛眼晶體上皮細胞;NBLE
FUCA1 Others Human 人 FUCA1 人細胞裂解液 (陽性對照)
腎上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
T-CEM細胞,人T細胞白血病細胞 615小鼠肺癌瘤株,HP615細胞 MesenFectagen? 間充質干細胞轉染試劑盒
NCI-H596(人肺腺鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2
Ca Ski(人上皮細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0014A-375(人惡性黑色素瘤細胞)5×106cells/瓶×2 小鼠血細胞;WEHI-3 [WEHI3]
CD2 Others Rat 大鼠 CD2 人細胞裂解液 (陽性對照)
人男性正常細胞;Hs68
人輸尿管上皮細胞*培養基 100mL
B16BL6細胞,小鼠黑色素瘤細胞 VERO C1008 (E6)(非洲綠猴腎細胞) EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KM932
CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113, His 標簽)
SH-SY5Y(人神經母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠泛醌細胞色素C還原酶核心蛋白Ⅱ(UQCRC2)ELISA試劑盒 ,英文名: UQCRC2 ELISA Kit
人胃泌素釋放肽前體(ProGRP)ELISA檢測試劑盒Humanpro-gastrin-releasingpeptide,ProGRPELISAKit 96T/48T
大鼠羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMG-CoAR)免疫試劑盒 Rat Hydroxymethylglutaryl CoA Reductase,HMG-CoAR ELISA kit
英文名稱RatpANCAELISAKit大鼠抗中性粒細胞胞漿抗體(甲醛固定)(pANCA)規格:96T/48T
寄生蟲總RNA分離試劑盒20次
ELISAKitGastrin人胃泌素規格:48T/96T
豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat angiotensin converting enzyme (ACE) ELISA Kit 大鼠血管緊張素轉化酶(ACE)ELISA試劑盒
Humanglomerularbasementmembraneantibogy,GBMELISAKit 人抗腎小球基底膜抗體(GBM)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanCyclophosphamide,CTXELISA試劑盒人*(CTX)ELISA試劑盒規格:96T/48T
組織HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次
HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISAKit人脊髓灰質炎病毒IgG(PV-IgG)ELISA試劑盒規格:96T/48T
*100T實驗方法人基質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人基質金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/GelatinaseB)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人基質金屬蛋白酶8/中性粒細胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人基質金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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