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總活性氧(Total ROS)檢測試劑盒200T實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數量不以應低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
總活性氧(Total ROS)檢測試劑盒200T實驗方法操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內,進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養細胞并誘導細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡,并設立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發波長546nm,發射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發波長Ex=546 nm; 發射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
總活性氧(Total ROS)檢測試劑盒200T實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
NCI-H520(人肺鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2
淋巴成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
ROBO2 Others Human 人 ROBO2 人細胞裂解液 (陽性對照)
NAMALWA細胞,人Burkitt`s淋巴瘤細胞 小鼠腎癌細胞株,RuCa細胞 人間充質干細胞-肝臟裂解物HMSC-hp L
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 Cdna-TGF-β1 Dinding Protein cDNA
CHO(倉鼠卵巢細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0118HT-29(人結腸癌細胞)5×106cells/瓶×2 小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D3
原代平滑肌細胞培養特制添加劑Many types of cells包裝:5/2.5/1ml
FAS Others Cynomolgus 食蟹猴 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人細胞裂解液 (陽性對照)
中國倉鼠卵巢細胞;CTLA4 Ig-24
中國倉鼠肺細胞;V79 卵巢癌細胞,SK-OV-3細胞 WCF細胞,團頭魴尾鰭細胞
人胚胎眼Tenon's囊成纖維細胞;HFTF
HA Others Influenza B 乙型流感 (B/Malaysia/2506/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)
FUT8 Others Human 人 FUT8 (aa 68-575) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人胚胎肌肉組織來源細胞;CCC-HSM-2
VERO細胞衍生株;SVP
OS-RC-2細胞,腎癌細胞 小細胞肺癌,SH-77細胞 人腎癌Wilms細胞;G401
KM小鼠子瘤株;U14
ICOSLG Others Mouse 小鼠 B7-H2 / CD275 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)免疫試劑盒 Human deoxyribonuclease Ⅰ,DNase-Ⅰ ELISA Kit
中性轉化酶(NI)測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
RatSolubleClusterofdifferentiation40ligand,sCD40LELISA試劑盒大鼠可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒規格:96T/48T
HumanInterleukin8,IL-8ELISA試劑盒人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒規格:96T/48T
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