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過氧亞硝基陰離子(ONOO-)檢測試劑盒200T使用說明書

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更新時間:2017-07-07 13:12:38瀏覽次數:317次

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過氧亞硝基陰離子(ONOO-)檢測試劑盒200T使用說明書NCI-H596(人肺腺鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2

滑膜細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

IL1R2 Others Cynomolgus 食蟹猴 IL1R2 / IL1RB 人細胞裂解液 (陽性對照)

T2細胞,轉HLA-2基因B細胞 小鼠癌細胞,MA891細胞 人神經元cDNAHN cDNA

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS2

CNE(人鼻咽癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0134KU812(人外周血嗜堿性白血病細胞)5×106cells/瓶×2 雜交瘤(B);Z1510A2G6A2C7

過氧亞硝基陰離子(ONOO-)檢測試劑盒200T使用說明書使用注意事項
1.微量試劑取用前請 離心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數量不以應低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
過氧亞硝基陰離子(ONOO-)檢測試劑盒200T使用說明書操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應515min
3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內,進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養細胞并誘導細胞凋亡;
1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡,并設立陰性對照組;
2)用PBS洗滌細胞兩次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
5)避光、室溫反應5 min
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發波長546nm,發射波長647 nm7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發波長Ex=546 nm; 發射波長Em=647 nm
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
過氧亞硝基陰離子(ONOO-)檢測試劑盒200T使用說明書實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結合。
1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer
2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細胞;
3)細胞洗滌:用預冷1×PBS4)重懸細胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細胞;
5Annexin V-FITC標記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
6PI標記:上機前5分鐘再加入5μLPI染色。
7)上機前,補加200μL1×Binding Buffer
人胚肺成纖維細胞;MRC-5

FANCA Others Human FANCA / FACA 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-7

K-562細胞,慢性髓原白血病細胞 小細胞肺癌細胞,NCI-H446細胞 人腎上腺皮質癌細胞;SW-13

KM小鼠網織細胞肉瘤瘤株;L

BST1 Others Mouse 小鼠 CD157 人細胞裂解液 (陽性對照)
APCS Others Rat 大鼠 Serum amyloid P component / APCS / SAP 人細胞裂解液 (陽性對照)

人胚胎氣管組織來源細胞;CCC-HBE-2

HeLa 人細胞

JEG-3人絨毛膜癌細胞 JEG-3 human choriocarcinoma cells MEM(GIBCO)+10%FBS

CD70 Protein Human 重組人 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 標簽)

大鼠神經皮質細胞(RNc)(1×106) SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞 Human
大鼠糖化白蛋白(GA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)免疫試劑盒 Human deoxypyridinoline,DPD ELISA Kit

蔗糖磷酸化酶測試盒 可見分光光度法 50/48

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