當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>細胞生物學試劑>>蛋白提取/檢測>> *蛋白激酶抑制劑100mg實驗方法
*蛋白激酶抑制劑100mg實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數量不以應低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
*蛋白激酶抑制劑100mg實驗方法操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內,進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養細胞并誘導細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡,并設立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發波長546nm,發射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發波長Ex=546 nm; 發射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
*蛋白激酶抑制劑100mg實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, Fc 標簽)
大鼠胰腺星狀細胞*培養基 100mL
BPIFA2 Others Human 人 BPIFA2 / C20orf70 人細胞裂解液 (陽性對照)
MA104非洲綠猴胚胎腎上皮細胞 MA104 Africa green monkey embryonic kidney epithelial cells DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
成骨細胞培養基ObM
NCI-H661(人大細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 腎上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
人低侵襲性脈絡膜黑色素素瘤細胞;OCM-1A
CSF2 Others Human 人 GM-CSF / CSF2 人細胞裂解液 (陽性對照)
CoC2(懸浮) 卵巢癌
COLO 205人結腸癌細胞 COLO 205 human colon cancer cells 1640+10% FBS
TNFSF8 Protein Rat 重組大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白
人角膜成纖維細胞 (HcorF)( 5×105 ) EPC, 大鼠血管內皮祖細胞 Rattus
小鼠小神經膠質細胞(MM)(5×105)
人雪旺細胞總RNAHSC tRNA
黃胸鼠肺成纖維細胞;YCR
C57BL/6小鼠T細胞淋巴瘤細胞;RMA 小鼠角膜上皮細胞*培養基 100mL
HBE, 正常人支氣管上皮細胞系 Human
NLGN1 Others Human 人 NLGN1 / Neuroligin-1 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠卵巢癌標志物CA125ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人腎上腺髓質素前體(Pro-ADM)免疫試劑盒 Human Proadrenomedullin,Pro-ADM ELISA Kit
MouseGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒規格:96T/48T
tComplementfragment4a,C4aELISA試劑盒大鼠過敏毒素/補體片斷4a(C4a)ELISA試劑盒規格:96T/48T
Humanmatrixmetalloproteinase4,MMP-4ELISA試劑盒人基質金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒規格:96T/48T
HumanPhosphorylatedacetylCoA,PaCoAELISAKit人磷酸化乙酰輔酶A(PaCoA)ELISA試劑盒規格:96T/48T
人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat neutrophil gelatinase associated lipocalin (NGAL) ELISA Kit 大鼠中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒
HumanBH3interactingdomaindeathagonist,BidELISAKit 人BH3結構域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanImmunoglobulinA,IgAELISA試劑盒*A(IgA)ELISA試劑盒規格:96T/48T
組織基質金屬蛋白酶(MMP-1)活性熒光定量檢測試劑盒20次
Humanleukoregulin,LRELISAKit人白細胞調節素(LR)ELISA試劑盒規格:96T/48T
*蛋白激酶抑制劑100mg實驗方法大鼠黃體生成素(LH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠氧化酶(XOD)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠環氧合酶2(COX-2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠*(cAMP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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