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變性蛋白裂解液50ml實驗方法

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更新時間:2017-07-10 12:18:12瀏覽次數:153次

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變性蛋白裂解液50ml實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數量不以應低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
變性蛋白裂解液50ml實驗方法操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應515min;
3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內,進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導細胞凋亡;
1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡,并設立陰性對照組;
2)用PBS洗滌細胞兩次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
5)避光、室溫反應5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
變性蛋白裂解液50ml實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結合。
1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細胞;
3)細胞洗滌:用預冷1×PBS4)重懸細胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細胞;
5Annexin V-FITC標記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
6PI標記:上機前5分鐘再加入5μLPI染色。
7)上機前,補加200μL1×Binding Buffer
EGFL7 Protein Human 重組人 EGFL7 / VE-statin 蛋白 (His 標簽)

大鼠食管平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL

REG4 Others Rat 大鼠 REG4 人細胞裂解液 (陽性對照)

A7r5 大鼠胸大動脈平滑肌細胞 A7r5 rat thoracic aortic smooth muscle cells 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

人肺間充質干細胞HPMSC

WTRL1(大鼠肺細胞) 5×106cells/瓶×2 原代肝實質細胞特制基礎培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/250/100ml
大鼠骨髓瘤細胞;Y3-Ag 1.2.3

CRP Others Human CRP / C-Reactive Protein 人細胞裂解液 (陽性對照)

AsPC-1 人轉移胰腺腺癌細胞

HuH-6人肝母細胞瘤細胞 HuH-6 human hepatoblastoma cell DMEM+10% FBS

BMP2 Protein Danio rerio (zebrafish) 重組斑馬魚 BMP-2 / BMP2A 蛋白

人腎臟上皮細胞(HREpiC)( 5×105 ) MN-c, 小鼠皮質神經元 Mouse
TERF1 Others Human TERF1 / TRF1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人羊膜上皮細胞cDNAHAmEpiC cDNA

正常大鼠腎細胞(EGF受體陽性);NRK49F

AGS細胞,胃腺癌細胞 人喉癌細胞,TU 686細胞 大鼠垂體瘤細胞;MMQ

雜交瘤(B);Z1510C6D10F4G6

TREM2 Others Human TREM2 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人神經軸突絲蛋白(NAFP)自身抗體免疫試劑盒 Human neuron axon filament protein(NAFP)autoantibody ELISA kit

MousegranzymesB,Gzms-BELISAKit小鼠顆粒酶B(Gzms-B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

人抗丙型肝炎病毒抗體(anti-HCV)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

humanMAXdimerizationprotein1,mxd1ELISA試劑盒人MAX二聚化蛋白1(mxd1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

Humanplacentalactogen,HPLELISAKit人胎盤催乳素(HPL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand 1 (TRAIL-R1) ELISA Kit 大鼠壞死因子相關凋亡誘導配體1(TRAIL-R1)ELISA試劑盒

HumanHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit 人熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanInfluenzavirusesA,FLUAELISA試劑盒人流感病毒A(FLUA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織基質金屬蛋白酶(MMP-2)*明膠法比色定量檢測試劑盒20

HumanLeptospiraIgG,LepIgGELISAKit人鉤端螺旋體IgG(LepIgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
變性蛋白裂解液50ml實驗方法大鼠甘露糖受體(MRELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠甘露糖結合凝集素(MBLELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠甘丙肽/甘丙素(GAL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠干細胞因子受體(SCFR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

 

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