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DNA 堿性膠上樣液 ,6×1.5mL*

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更新時間:2017-07-14 12:31:01瀏覽次數:194次

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DNA 堿性膠上樣液 ,6×1.5mL*使用方法 一、準備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產品的使用手冊)。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

DNA 堿性膠上樣液 ,6×1.5mL*產品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發了本產品。它具有下列特點: 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 RNA 進行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
DNA 堿性膠上樣液 ,6×1.5mL*詳細介紹:

DNA 堿性膠上樣液 ,6×1.5mL*使用方法:
一、準備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應效率)。但如果實驗條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
DNA 堿性膠上樣液 ,6×1.5mL*后續處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉移到帶正電的尼龍膜上,然后進行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經過同位素標記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向對置進行放射自顯影。
上皮細胞培養基MEpiCM-prf

HA Others H7N2 甲型流感 H7N2 (A/ruddy turnstone/New Jersey/563/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0910

大鼠氣管上皮細胞;RTE 慢性髓原白血病細胞,K-562細胞 P3X63Ag8.653細胞,小鼠骨髓瘤細胞

ACHN, 人腎細胞腺癌細胞 Human

CRTAM Others Human CRTAM 人細胞裂解液 (陽性對照)
人脂肪間充質干細胞(脂肪)(HMSC-ad)(5×105)

人紅系白血病細胞;TF-1

CM-R024大鼠淋巴成纖維細胞*培養基100mL

小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-1 小鼠小腸血管內皮細胞*培養基 100mL

CSC, 小鼠心肌細胞 Mouse

SPARC Others Mouse 小鼠 SPARC / BM-40 人細胞裂解液 (陽性對照)
人紅系白血病細胞;TF-1

人脂肪間充質干細胞(脂肪)(HMSC-ad)(5×105)

CM-R024大鼠淋巴成纖維細胞*培養基100mL

小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-1 小鼠小腸血管內皮細胞*培養基 100mL

CSC, 小鼠心肌細胞 Mouse

SPARC Others Mouse 小鼠 SPARC / BM-40 人細胞裂解液 (陽性對照)
Anti-Rad17/FITC 熒光素標記細胞周期檢控Rad17蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

Beta-Amyloid (31-35) β淀粉樣肽31-35(多肽蛋白)Multi-class antibodies規格: 0.1mg

腸道內富含的Kruppel樣因子/上皮鋅指蛋白抗體 Anti-Klf4 0.1ml

SPANX 英文名稱: /抗原11.3抗體 0.1ml

FAP1 英文名稱: Fas相關磷酸酶1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-PNK1 (Ser114/Thr118) 磷酸化多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗體 規格 0.1ml

Beta-Amyloid (31-35) β淀粉樣肽31-35(多肽蛋白)Multi-class antibodies規格: 0.1mg
Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗馬IgM 0.1ml

FOX3 英文名稱: 神經元核抗原抗體 0.1ml

降鈣素基因相關肽抗體 Anti-CGRP 0.1ml

Anti-OPN/FITC 熒光素標記骨橋蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PKB/AKT-1 蛋白激酶B 規格 0.1ml

Rabbit Anti-Guinea IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗豚鼠IgGMulti-class antibodies規格: 0.1ml
DNA 堿性膠上樣液 ,6×1.5mL*TARC/CCL17(Human thymus activation regulated chemokine) ELISA Kit 人胸腺活化調節趨化因子Multi-class antibodies規格: 48T

Anti-GADD34 生長抑制DNA損傷基因34抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgG/APC APC標記的小鼠抗人IgG 規格 0.1ml

human similar to RIKEN cDNA 4931408D14 gene ELISA kit 人類似RIKEN cDNA 4931408D14 基因 96T

SPRN 英文名稱: 新朊蛋白抗體 0.2ml

CBLN2 英文名稱: 小腦肽2抗體 0.2ml

Anti-GADD34 生長抑制DNA損傷基因34抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml

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