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海量 PCR 片段純化試劑盒5次保存

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更新時間:2017-07-14 13:08:46瀏覽次數:159次

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海量 PCR 片段純化試劑盒5次保存使用方法 一、準備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產品的使用手冊)。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

海量 PCR 片段純化試劑盒5次保存產品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發了本產品。它具有下列特點: 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 RNA 進行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
海量 PCR 片段純化試劑盒5次保存詳細介紹:

海量 PCR 片段純化試劑盒5次保存使用方法:
一、準備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應效率)。但如果實驗條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
海量 PCR 片段純化試劑盒5次保存后續處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉移到帶正電的尼龍膜上,然后進行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經過同位素標記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向對置進行放射自顯影。
CL-0044C2C12(小鼠成肌細胞)5×106cells/瓶×2

GPNMB Others Human GPNMB / Osteoactivin 人細胞裂解液 (陽性對照)

肌細胞分離液MDS

OVAC細胞,人卵巢癌細胞 猴腎C細胞,M145細胞 視網膜微血管內皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

EBTr (NBL-4) (牛胚氣管細胞) 5×106cells/瓶×2

HREpC Pellet 人類腎小管上皮細胞團塊 > 1 mio.cells 人心肌細胞cDNAHCM cDNA
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/England/195/2009) HA 人細胞裂解液 (陽性對照)

人口腔角質細胞HOK

KMB17 人胚肺成纖維細胞

CM-H083人臍動脈內皮細胞*培養基100mL

Hepa 1-6, 小鼠肝癌細胞

人癌細胞;MDA-MB-453 人角膜成纖維細胞*培養基 100mL
人口腔角質細胞HOK

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/England/195/2009) HA 人細胞裂解液 (陽性對照)

KMB17 人胚肺成纖維細胞

CM-H083人臍動脈內皮細胞*培養基100mL

Hepa 1-6, 小鼠肝癌細胞

人癌細胞;MDA-MB-453 人角膜成纖維細胞*培養基 100mL
Anti-Phospho-eNOS (Ser113)/FITC 熒光素標記磷酸化一氧化氮合成酶3抗體(內皮型)IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

Anti-Zyxin/FITC 熒光素標記斑聯蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

β-連環蛋白抗體 Anti-β-catenin/β-cats 0.1ml

Goat Anti-Guinea pig IgG/PE PE標記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

FbxW2 英文名稱: FbxW2蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Podoplanin Protein/gp36 平足蛋白抗體(淋巴管內皮細胞蛋白) 規格 0.1ml

Anti-Zyxin/FITC 熒光素標記斑聯蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Goat Anti-rat IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的羊抗大鼠IgG 0.1ml

FUS 英文名稱: 粘液樣脂肪肉瘤蛋白FUS1抗體 0.2ml

CC趨化因子受體2/5抗體 Anti-CCR-2/5 0.2ml

Anti-NPM/FITC 熒光素標記核仁磷酸蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PNPLA1 patatin樣磷脂酶1抗體 規格 0.2ml

Anti-Gentamicin/Gold 膠體金離子標記兔*抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.5ml(35nm-40nm)
海量 PCR 片段純化試劑盒5次保存Substance P 小鼠P物質Multi-class antibodies規格: 48T

Anti-FBN1 原纖維蛋白1抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的小鼠抗大鼠IgG 規格 0.1ml

CLU(Human clusterin) ELISA Kit 人凝聚素 96T

SLP76 英文名稱: 淋巴細胞胞漿蛋白2抗體 0.1ml

C4orf22 英文名稱: 4號染色體開放閱讀框22抗體 0.2ml

Anti-FBN1 原纖維蛋白1抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml

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