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0.5mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個保存

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更新時間:2017-07-14 13:10:33瀏覽次數:169次

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0.5mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個保存使用方法 一、準備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產品的使用手冊)。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

0.5mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個保存產品及特點:

尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發了本產品。它具有下列特點: 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 RNA 進行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
0.5mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個保存使用方法:
一、準備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應效率)。但如果實驗條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/BisTEMED 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
0.5mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個保存后續處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉移到帶正電的尼龍膜上,然后進行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經過同位素標記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向對置進行放射自顯影。
CL-0452T/G HA-VSMC(人血管平滑肌細胞)5×106cells/瓶×2

GPC5 Others Human Glypican 5 / GPC5 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人腎上皮細胞RNAHREpiC miRNA5 μg

ScaBER細胞,膀胱鱗癌細胞 人非小細胞肺腺癌細胞,NCI-H2087細胞 RN-h, 大鼠海馬趾神經元

豚鼠胚胎細胞;104C1

BST1 Others Human CD157 人細胞裂解液 (陽性對照)
NRN1 Others Human NRN1 / Neuritin 1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人類成纖維細胞系;CNLMG-B5538SKIN

CM-H021人前列腺平滑肌細胞*培養基100mL

Lncap細胞,前列腺癌細胞 膀胱變移細胞癌細胞,T-24細胞 人胚腎細胞;293 Cells, low passage

615小鼠癌瘤株;Ca763

TIGIT Others Human TIGIT / VSTM3 人細胞裂解液 (陽性對照)
人類成纖維細胞系;CNLMG-B5538SKIN

NRN1 Others Human NRN1 / Neuritin 1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

CM-H021人前列腺平滑肌細胞*培養基100mL

Lncap細胞,前列腺癌細胞 膀胱變移細胞癌細胞,T-24細胞 人胚腎細胞;293 Cells, low passage

615小鼠癌瘤株;Ca763

TIGIT Others Human TIGIT / VSTM3 人細胞裂解液 (陽性對照)
Anti-Phospho-eNOS (Thr495)/FITC 熒光素標記磷酸化一氧化氮合成酶3抗體(內皮型)IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

Anti-ZO-1/FITC 熒光素標記胞質緊密粘連蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

半*蛋白酶8抗體 Anti-Caspase-8 0.1ml

Goat Anti-Guinea pig IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

FBXW8 英文名稱: FBXW8蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Pol II/RNA polymerase II RNA聚合酶II抗體 規格 0.2ml

Anti-ZO-1/FITC 熒光素標記胞質緊密粘連蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

FAM123B 英文名稱: 腎母細胞瘤X蛋白抗體 0.2ml

成骨特異性轉錄因子抗體 Anti-CBFA1/RUNX2 0.1ml

Anti-Notch3/FITC 熒光素標記跨膜受體蛋白Notch-3抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh POC5 細胞中心粒蛋白抗體 規格 0.2ml

Anti-TORC1/CRTC1/FITC 熒光素標記環腺苷酸應答元件結合蛋白轉錄共激活因子TORC1抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
0.5mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個保存MCP-4/CCL13(Human monocyte chemotactic protein 4) ELISA kit 人單核細胞趨化蛋白4Multi-class antibodies規格: 48T

Anti-FSH 促卵泡刺激素抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的小鼠抗人IgM 規格 0.1ml

fMet(Human formylmine) ELISA Kit 人甲酰甲硫酸 96T

SLITRK4 英文名稱: 神經突觸相關蛋白SLITRK4抗體 0.2ml

Collagen II 英文名稱: Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體 0.1ml

Anti-FSH 促卵泡刺激素抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml

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