0.5mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個(gè)保存產(chǎn)品及特點(diǎn):

尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式，含有電泳所需要的所有試劑，即開即用，十分方便，免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活，可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE，以便對長度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液，可以防止甘油的干擾。
0.5mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個(gè)保存使用方法：
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿（詳見該產(chǎn)品的使用手冊）。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍，得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中，按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，搖晃致溶， 立即使用。注意：放置時(shí)間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積，一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液，配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制：在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會(huì)溶解在這少量溶液中）。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積，在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右，直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后，將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣（氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率）。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限，此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過硫酸銨。注意：即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis，TEMED 和 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化，TEMED 和 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠，然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后，在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用，需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液，充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
0.5mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個(gè)保存后續(xù)處理：
1. 染色觀察：將凝膠一面的玻璃板揭開，直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色，包括銀染（固定、漂洗、顯影和定影等步驟）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上，然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影：如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記，則將凝膠一面的 玻璃板揭開，用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來，然后包上保 鮮膜，真空抽干，然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
CL-0452T/G HA-VSMC(人血管平滑肌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

GPC5 Others Human 人 Glypican 5 / GPC5 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人腎上皮細(xì)胞RNAHREpiC miRNA5 μg

ScaBER細(xì)胞，膀胱鱗癌細(xì)胞 人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞,NCI-H2087細(xì)胞 RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元

豚鼠胚胎細(xì)胞;104C1

BST1 Others Human 人 CD157 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
NRN1 Others Human 人 NRN1 / Neuritin 1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人類成纖維細(xì)胞系;CNLMG-B5538SKIN

CM-H021人前列腺平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

Lncap細(xì)胞，前列腺癌細(xì)胞 膀胱變移細(xì)胞癌細(xì)胞,T-24細(xì)胞 人胚腎細(xì)胞;293 Cells, low passage

615小鼠癌瘤株;Ca763

TIGIT Others Human 人 TIGIT / VSTM3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人類成纖維細(xì)胞系;CNLMG-B5538SKIN

NRN1 Others Human 人 NRN1 / Neuritin 1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

CM-H021人前列腺平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

Lncap細(xì)胞，前列腺癌細(xì)胞 膀胱變移細(xì)胞癌細(xì)胞,T-24細(xì)胞 人胚腎細(xì)胞;293 Cells, low passage

615小鼠癌瘤株;Ca763

TIGIT Others Human 人 TIGIT / VSTM3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Anti-Phospho-eNOS (Thr495)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化一氧化氮合成酶3抗體(內(nèi)皮型)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-ZO-1/FITC 熒光素標(biāo)記胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

半*蛋白酶8抗體 Anti-Caspase-8 0.1ml

Goat Anti-Guinea pig IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

FBXW8 英文名稱： FBXW8蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Pol II/RNA polymerase II RNA聚合酶II抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-ZO-1/FITC 熒光素標(biāo)記胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

FAM123B 英文名稱： 腎母細(xì)胞瘤X蛋白抗體 0.2ml

成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子抗體 Anti-CBFA1/RUNX2 0.1ml

Anti-Notch3/FITC 熒光素標(biāo)記跨膜受體蛋白Notch-3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh POC5 細(xì)胞中心粒蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-TORC1/CRTC1/FITC 熒光素標(biāo)記環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
0.5mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個(gè)保存MCP-4/CCL13(Human monocyte chemotactic protein 4) ELISA kit 人單核細(xì)胞趨化蛋白4Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-FSH 促卵泡刺激素抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格 0.1ml

fMet(Human formylmine) ELISA Kit 人甲酰甲硫酸 96T

SLITRK4 英文名稱： 神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK4抗體 0.2ml

Collagen II 英文名稱： Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體 0.1ml

Anti-FSH 促卵泡刺激素抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml